探究人唾液淀粉酶最适PH（碘-淀粉比色法）.docxVIP

探究人唾液淀粉酶的最适PH（碘-淀粉比色法）欧奇灿 学号：201680075临床医学“5+3”2班3组摘要：唾液淀粉酶是由唾液腺分泌的一种水解酶，可作用于可溶性淀粉、直链淀粉、糖原等α-1,4-葡聚糖等，属于α-淀粉酶的一种。酶学与医学联系紧密，测定酶的最适pH，有利于我们把酶学知识运用于临床诊断与应用治疗。本实验尝试用碘-淀粉比色法测定唾液淀粉酶最适pH，加深对酶学知识的理解。关键词：缓冲液；唾液淀粉酶；分光光度计 前言：人体内各种代谢反应，都离不开酶的催化作用，酶量的改变以及酶活性的改变都会引起人体化学反应的异常或紊乱，因此酶在人体内是否能发挥正常活性关系着人体内环境的稳定。而pH是影响酶活性的一个重要因素，因此，通过探究实验探究人唾液淀粉酶的最适pH，不仅可以检测我们的生物化学实验操作能力和探究能力，也可以加深我们对酶学知识的理解。正文:【实验原理】酶是具有高效催化能力的生物大分子物质，其化学结构上具有许多极性基团，在不同酸碱环境中，这些基团的解离状态不同，所带电荷也不同。只有当酶处于一定的解离状态，才能和作用物结合。因此，溶液的pH对酶活性影响很大。若其他条件不变，酶只有在一定的pH范围内才能表现出催化活性。在某pH时，酶催化活性最大，此pH称为酶作用的最适pH。当溶液的pH偏离最适pH时，酶活性降低，甚至失活。淀粉经唾液中淀粉酶的水解，生成糊精和麦芽糖。在底物过量的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物，其颜色深浅与空白管颜色的差值和唾液淀粉酶的活力成正比。在底物过量的条件下，相同时间内，在温度、酶浓度相同、pH不同的条件下，越接近最适 pH的反应体系中酶活性越高，消耗淀粉的量越大，剩余淀粉与过量碘液生成的颜色越浅，吸光度越小。本实验利用分光光度计测出各管的吸光度后，取处于降低与升高趋势之间的较小吸光度范围对应的 pH 值即为唾液淀粉酶的最适pH。【仪器与试剂】仪器材料：试管架 ，试管，烧杯，一次性纸杯，移液枪，刻度吸管，洗耳球，胶头滴管，pH试纸，恒温水浴箱，分光光度计试剂药品：2.5g/L淀粉溶液，碘液，0.2mol/L NaH2PO4、0.2mol/LNa2HPO4，唾液，纯净水【实验步骤】1、唾液的获取纯净水先漱口1～2次，然后含一大口水约2分钟，其间做咀嚼运动，然后将水和唾液一同收集至烧杯中。【1】2、不同pH缓冲液的配制【2】取8支试管，编号 ，按表1-1操作，再加蒸馏水至10mL。用pH试纸检测各缓冲液pH。（pH7.0的缓冲液配制2次） 表1-1 不同pH缓冲液配制 （用量：ml）试 9pH5.86.06.26.4 6.66.87.07.27.40.2mol/LNa2HPO40.4000.6150.9251.3251.8752.4503.0503.6004.0500.2mol/LNaH2PO44.6004.3854.0753.6753.1252.5501.9501.4000.950H2O 5.03、淀粉用量的确定 取5支试管，按表1-2淀粉用量进行配制，之后比较选出适当颜色深浅的那支试管。【3】 表1-2 淀粉用量的确定 (用量：ml)试管1 2 345pH7.0缓冲液0.90.90.90.90.92.5g/L淀粉液0.050.10.2 0.3-稀释10倍唾液0.10.10.10.10.1混匀，37℃水浴5min后每管加2滴碘液H2O 2.95 2.9 2.8 2.7 3.0混匀，观察现象，选颜色适中一支，并记录淀粉用量实验结果：加碘液后加水，1号试管（-）颜色淡紫近无色，2号试管（+）颜色淡蓝色适中，3、4试管（++）蓝色较2号深，5号淡黄近无色（-）。即确定2.5g/L淀粉用量0.1g。4、酶液稀释倍数确定【4】取4支试管，按表1-3进行配制。表1-3 酶液稀释用量 （用量：ml）试管1234稀释倍数酶液H2O51.04.0100.54.5150.44.6200.254.75再取5支试管，按表1-4进行配制。 表1-4 酶液稀释倍数确定 （用量：ml）试管12345稀释倍数5101520空白酶液0.10.10.10.10.1pH7.0缓冲液0.90.90.90.90.92.5g/L淀粉 0.1 （由步骤3确定）混匀，37℃水浴5min后每管加2滴碘液H2O 3 3 3 3 3混匀，观察现象，选适中一支，并记录稀释倍数【5】实验结果：1（近）、2（+）、3（++）、4（++）、5（++++）号