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烟草青枯病土壤微生物数量及生理群的测定 匡传富 何志明 汤若云等 摘 要 在不同季节，研究了不同程度感染青枯病菌的烟草土壤中的细菌、放线菌和真菌的平均数，测定了土壤中固氮菌、纤维素分解菌、亚硝酸细菌、硝酸细菌、反硝化细菌、硫化细菌、反硫化细菌等生理群的平均数。 结果表明：青枯病重发丘块四季中细菌和真菌平均数多、放线菌平均数少；轻发丘块则细菌和真菌平均数少、放线菌平均数多。 测定的7种微生物生理群中，青枯病重发丘块四季中硝酸细菌和反硫化细菌平均数少、反硝化细菌平均数多，轻发丘块则硝酸细菌和反硫化细菌多、反硝化细菌平均数少。 从不同季节来看，重度发病地块春季细菌数最多，夏季硝酸细菌少。 关键词： 烟草 青枯病 土壤微生物 生理群 经调查发现烟草青枯病发生危害时，在其他栽培条件相同的情况下，同一类型稻田土或旱土的不同地块，或同一地块不同地段的烟地，青枯病发生危害轻重不同，其原因是否与土壤中微生物群落有关。这项工作以往很少有人研究。 本研究试图通过对烟草青枯病不同病情的土壤进行微生物数量及组成分析，为筛选烟草土壤中青枯病菌拮抗微生物奠定基础，为深入开展烟草青枯病生物防治研究提供理论依据。 材料和方法 土壤来源：选择了湖南省郴州市桂阳县仁义乡汪山村烟草青枯病常发旱地（黄壤土）2.5公顷，栽植烤烟品种k326，采用五点取样法，在病害发生最多时调查一次，烟叶采收后调查一次。 确定面积0.083公顷,青枯病病指53.6(1号土壤);面积0.073公顷;青枯病病指34.5(2号土壤);面积0.08公顷，青枯病病指11.2(3号土壤)为取土来源，分春（3月中旬）、夏（6月中旬）、秋（10月中旬）、冬（12月中旬）四个季节取土分析。 培养基 细菌用牛肉汁蛋白胨琼脂 放线菌用高氏号琼脂 真菌用马丁氏琼脂 固氮菌用改良阿须贝琼脂 亚硝酸细菌用改良斯蒂芬逊培养液 硝酸细菌用亚硝酸盐培养液 反硝化细菌采用柠檬酸培养液 硫化细菌采用低亚硫酸盐培养液 反硫化细菌采用有机氮源培养液 化学试剂 孟加拉红，链霉素，重铬酸钾，对氨基苯磺酸，α─萘胺、二苯胺、KI、HgI2、KOH、Bacl2、等均为分析纯。 测定方法 细菌、放线菌、真菌、固氮菌、纤维素解菌的总数测定采用平板菌落计数法。 亚硝酸细菌和硝酸细菌应用稀释法：取10-3～10-7等5个稀释度，每个稀释度3个重复，每管接土壤悬液1毫升，在25-28℃下培养10～14天，用格利斯试剂Ⅰ、Ⅱ 测定NO2-，用二苯胺试剂测定NO3-。 反硝酸细菌应用稀释法：取10-3～10-7等5个稀释度，每个稀释度3个重复，每管接土壤悬液1毫升，在28-30℃下培养14天，用萘氏试剂测定NH3。用格利斯试剂检查NO2，检查杜氏小管有无气泡测定N2。 硫化细菌应用稀释法：取10-3～10-7等5个稀释度，每个稀释度3个重复，每管接土壤悬液0.5毫升，在28-30℃下培养15天，用1%BaCl2溶液测定SO42-是否存在。 反硫化细菌应用稀释法：取10-3～10-7等5个稀释度，每个稀释度3个重复，每管接土壤悬液0.5毫升，在28-30℃下培养14天，检查有无黑色FeS沉淀。 结果与分析 土壤主要微生物种类和数量 三种烟草土壤中主要微生物种类有细菌、放线菌和真菌。 它们在土壤中的数量，在1、2、3号土中细菌最多，真菌次之，放线菌再次。 三种土壤比较，细菌平均数以1号土最多，2号和3号土中细菌平均数相差不大，放线菌平均数以3号土最多，1、2号较多，且差异小，真菌平均数以1号土最多，2号次之，3号最少（见表1）。 不同季节三种烟草土壤中细菌、放线菌、真菌数量变化 1号土春、夏、秋、冬四季细菌均最多，数量稳定。放线菌春、冬季较多，夏、秋季较少，真菌以夏季最多，春秋冬季少，数量稳定。 2号土春夏秋冬细菌均最多，放线菌春冬季较多。真菌以夏季最多，冬季次之，春、秋季少。3号土春夏秋冬细菌均最多，放线菌春冬季较多，春夏秋冬四季真菌较少（见表2）。 烟草土壤中主要微生物生理群及其数量 经测定在1、2、3号烟草土壤中均有纤维素分解菌、亚硝酸细菌、硝酸细菌、反硝化细菌、硫化细菌、反硫化细菌。在1、2、3号土中均未检测到好气性固氮菌。 纤维素分解菌平均数量以3号土最多，其次是1号土、2号土最少 亚硝酸细菌平均数量1号和3号土居多，2号土比1号和3号土少二分之一；硝酸细菌平均数以3号土最多，其次为2号土，1号土较少； 反硝化细菌平均数以1号土最多，其次为2号土，3号土较少； 硫化细菌平均数以2号土最多，其次是1号土，3号土较少； 反硫化细菌平均数以3号土较多，2号土次之，1