一种基于香豆素衍生物的铁离子水溶性荧光探针的合成及其应用.docVIP

一种基于香豆素衍生物的铁离子水溶性荧光探针的合成及其应用 　　摘要设计合成了一种基于香豆素衍生物的水溶性荧光探针7二乙氨基3甲醛香豆素，并通过1NMR，13CNMR和MS确认其结构。探针具有良好的荧光发射性能，荧光最大发射峰位于71 nm； 向其中加入e3+后，荧光强度随着e3+浓度的增加而逐渐减弱。探针L的荧光发射强度与e3+的浓度在002～6000 μmol/L范围内呈良好的线性关系，可对e3+进行定性与定量检测，检出限为22 nmol/L （S/N=3），对e3+的选择性良好，不受其它常见金属离子的干扰。此外，探针对e3+的检测具有可逆性。本探针具有很好的水溶性，在生理p环境中检测效果较好成功用于人体淋巴肿瘤细胞Ramos中e3+荧光成像。 　　关键词荧光探针； 铁离子； 水溶性； 细胞成像 　　[K][Q（32，X，DY-W][CD15] 　稿；受 　　本文系国家自然科学基金项目（No 2157612）、江苏出入境检验检疫局科技计划项目（No 2016K51）和镇江市重点研发计划――社会发展项目（Nos S201501，S2016019）资助 　　Email： luckwanting@163com； hanjuan@ujseducn 　　1引 言 　　在各种微量元素中，铁元素是人体生理活动中不可或缺的元素，参与DNA和RNA的合成以及维持细胞内渗透压和酸碱平衡等过程[1～]。生物机体内e3+缺失会引发多种生理活动紊乱，导致各种疾病的发生[5]。研究表明，多种疾病，如心脏病、糖尿病甚至某些肿瘤， 与生物体内摄入过量的铁有关[6]。因此，建立高选择性和高灵敏度的铁离子检测方法有重要的理论和实际应用意义。 　　目前，e3+的检测方法主要有原子吸收分光光度法（AAS）[7]、紫外分光光度法[8]、电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICPAES）[9]、电感耦合等离子体质谱法（ICPMS）[10]、电化学分析法[11]和荧光滴定法等[12]。荧光滴定法因具有选择性高、灵敏、成本低和易于操作等优点而备受关注[13～15]。但目前用于检测e3+的荧光探针分析方法较少，常见的荧光基团包括卟啉荧光素[16]、罗丹明[17]、香豆素[18]、萘酰亚胺类[19]等，其中香豆素基团凭借其独有的苯并芘喃酮结构，具有荧光量子产率高、斯托克斯位移大等特性，是一种理想的荧光配体。Li等[20]基于香豆素基团合成了用于2O （1∶1， V/V）环境中识别检测e3+的荧光探针，随着e3+的加入，探针的荧光强度逐渐增强。Wang等[21]基于香豆素基团合成了一种荧光探针用于乙醇水（95：5， V/V）体系中e3+的识别检测，荧光强度与e3+浓度（33～167 μmol/L）呈线性相关，检出限为033 μmol/L。该测试液主要为乙醇，探针的水溶性较差，且在进行细胞实验时高浓度的乙醇会对细胞产生毒性，此外灵敏度也较低。En等[22]基于香豆素基团合成了一种荧光探针，用于e3+的识别检测，线性范围为10～1000 μmol/L，检出限为03 μmol/L，该探针的检测灵敏度还有待提高，且在生理p下其荧光效果较差，不利于其在生物方面的应用。 　　本研究合成了基于香豆素染料的荧光探针L， 此探针具有良好的荧光发射性能， 且e3+的加入会导致探针荧光淬灭。基于此， 此探针可用于e3+的灵敏检测，选择性良好。此探针具有良好的水溶性，用于人淋巴肿瘤细胞Ramos中e3+的检测，结果令人满意。 　　2实验部分 　　21仪器和试剂 　　hermo LXQ液相色谱离子阱质谱联用仪（美国hermo公司）； AVANCE Ⅱ00 Mz核磁共振光谱仪（瑞士Bruker公司）； Cary Eclipse荧光分光光度计（澳大利亚瓦里安有限公司）； UV250紫外可见分光光度计（日本岛津公司）； DM2500倒置荧光显微镜（德国徕卡公司）。 　　（二乙氨基）水杨醛、丙二酸二乙酯、N，N二甲基甲酰胺（DM）、冰醋酸（美国Aldrich公司）； 人体淋巴肿瘤细胞Ramos由江苏大学食品与生物工程学院提供； 其余试剂均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）； 实验用水为二次蒸馏水。 　　22合成方法 　　探针的合成方法如图1所示。 　　2217二乙氨基香豆素（1）的合成参照文献[22]方法进行合成。将193 g（10 mmol）（二乙氨基）水杨醛、32 g丙二酸二乙酯（20 mmol）、1 mL哌啶加入30 mL乙醇中，回流搅拌6 h； 减压蒸馏除去乙醇。向混合物中加入20 mL冰醋酸和20 mL浓盐酸，75℃回流搅拌6 h。反应完成后，混合溶液冷却至室温，再加入100 mL冰水。随后逐滴加入0%NaO溶液调节至p 5，产