2电镜原理及透射电镜构造-生物技术.pptVIP

电子显微镜术（Electron Nicroscopy） 电镜原理 分辨本领 放大倍率 反差 景深与焦深 像差 （一）分辨本领（resolving power） （二）放大倍率 ML=MO×Me ML：总放大倍率， Mo：物镜放大率，Me：目镜放大率 （三）反差（contrast）（对比度） （四）景深与焦深（depth of field, depth of focus） （五）像差（aberration） 第一章 透射电子显微镜 以波长极短的电子束作为照明源，用电磁透镜聚焦成像的一种高分辨率、高放大倍率的电子光学仪器 。 （一）电子枪（electron gun） （二）电子束的特性 2．可折射性 （三）透射电镜的结构 1．镜筒 2. 辅助系统 物镜的镜口角 电子枪构造示意图 光学显微镜与电子显微镜的比较 光镜及电镜构造 球差示意图 色差形成原理 像散造成图象的畸变 畸变的种类 * * 电子流（束）具有光波的微粒性和波动性，且波长很短 光镜油浸物镜： 仪器理论分辨本领：d=1/2λ λ越短，d 越小，则分辨本领1/d 越高。 只有缩短λ，才能提高分辨本领。 光线通过玻璃透镜时能够折射、聚焦——放大 电子束代替可见光 电子透镜代替光学透镜 电子显微镜产生的基础 轴对称分布的电磁场具有能使电子束偏转、聚焦的作用。即轴对称的磁场对电子束起透镜作用——电子透镜 电子可以由电磁场的改变而偏折 用油浸物镜时，光镜总放大倍率 ML=100×10=1000 空放大、有效放大 光镜：主要由样品结构成分对光吸收程度不同形成。 用染料的颜色来提高。 透射电镜：主要由样品内各种结构对入射电子的散射程度不同引起。 电子的散射程度又称为电子密度 电子致密（electron dense） 电子透明（electron lucent） 电子染色：用重金属原子与样品中某些结构和成分选择性地结合增强反差 景深：物在光轴方向前后移动一定距离(d1)屏幕像仍清晰。 焦深：物不动，幕在光轴方向前后移动一定距离(d2)像清晰。 LM的d1比样品厚度小得多，不会出现结构重叠，可重建三维 EM的d1大大超过样品厚度，利于电镜聚焦。 EM的d2甚长，照相底片的安装距离可以很大。 由透镜所引起的像的“失真” l．球差（sphenical aberration） 2．色差（ Chromatic aberration） 3．像散（Astigmatism） 4．像的畸变（image distortion） 阴极： 顶端 灯丝 通以电流，产生电子。 阳极： 下端 中央有一小孔的金属板。 二极之间: 加速电压 阴极和阳极之间: 控制极（栅极） 作用:形成电子枪交叉点 改变电子束流的大小 一、透射电镜的原理及构造 1．波长短 电子束波长甚短，与加速电压关系： 加速电压与波长成反比：加速电压越高，波长越短； 波长与分辨距离成正比：波长越短，分辨距离越低， 分辨本领越高。 分辨本领与加速电压成正比：想要达到高分辨本领，必须在高的加速电压条件下才能得到。 通过电子透镜折射聚焦 电流越大，焦距越短，放大倍数越大 3．穿透能力弱 高真空镜筒 切片必须超薄（小于0.1μm） 铜网和有机支持膜代替玻璃载玻片 4．成象直接不可见 荧光屏/照相底片感光 拍照片后进行研究 5．能激发金属产生X射线 加强个人防护 ? LM EM 照明源 灯泡（可见光） 电子枪 聚光镜 普通玻璃透镜 （1个） 磁场—通直流电的线圈 （2—3个） 样品 玻璃载玻片上 置有支持膜的铜网上 ? 物镜 目镜 物镜 中间镜 通直流电的线圈 投影镜 观察 眼/底片 荧光屏/底片 观察窗 （1）照明系统：包括电子枪，聚光镜 （2）样品室：包括放置样品的样品杯及更新样品的装置。 样品室左右有隔离阀门。 （3）成像放大系统：物镜、中间镜、投影镜。 （4）观察记录系统：视窗，观察荧光屏上的图像。 照相室，其上也有隔离阀门。 供电系统 电压必须稳定——λ稳定 电流必须稳定—— M稳定 真空系统 镜筒高真空：样品室 照相室 冷却系统 调控系统 合轴对中 照明亮度 M 聚焦 O：物镜 S：标本面 α：1/2镜口角