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PSMB5对神经干细胞增殖能力的影响摘要目的：应用基因沉默技术手段，观察下调PSMB5对NSCs增殖潜能的影响，揭示年龄依赖性NSCs 增殖能力降低的机制，以期为神经退行性疾病的治疗提供新思路。方法：1.体外分离培养胚胎(E14)、新生(P0)、幼年(P30)、成年(P90)和老年(P540)小鼠SVZNSCs，观察其神经球形成周期和神经球形成率。2.分别提取不同年龄阶段（E14、P0、P30、P90、P540）Balb/c小鼠SVZ组织蛋白，通过Western Blot 分析其PSMB5 蛋白的表达水平差异。3.设计合成PSMB5-siRNA，电穿孔法转染NSCs，电转后48h 提取细胞总RNA，72h提取细胞全蛋白，RT-PCR及Western Blot分别从转录水平和蛋白水平测定PSMB5沉默效率，荧光分光光度法检测蛋白酶体活性。4.测量神经球平均直径和数量，并应用BrdU掺入实验分析PSMB5 基因沉默对NSCs增殖能力的影响，5.Western Blot 检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1 及CDK4的表达变化。结果：1.分离培养的不同年龄阶段小鼠NSCs，其中与E14或P0相比，P30、P90及P540 小鼠NSCs 形成神经球的周期较长，神经球形成率较低，提示NSCs增殖能力呈年龄依赖性下降趋势；同时，Western Blot检测各年龄组SVZ组织蛋白显示PSMB5 的表达水平随年龄增高也呈递减趋势，提示PSMB5可能参与NSCs增殖能力的调控。2. Real-timePCR定量分析法和Western Blot半定量分析法分别检测siRNA组和对照组PSMB5mRNA及PSMB5蛋白的表达变化，结果显示siRNA组PSMB5 mRNA和蛋白表达水平较对照组分别降低61.23±1.62%和40.11±2.45%（P0.05），且蛋白酶体活性较对照组降低24.36±0.14%（P0.01），提示PSMB5-siRNA电转染NSCs 能够抑制其PSMB5的表达，并下调蛋白酶体活性。3. siRNA组神经球平均直径和数量均较对照组显著降低（P0.05）；BrdU掺入实验结果显示siRNA组BrdU阳性率21.58±3.29%较对照组53.47±7.36%显著下降（P0.05），提示PSMB5基因沉默能抑制NSCs 增殖能力。4. 应用WesternBlot半定量分析转染后细胞周期相关蛋白的表达水平，结果显示siRNA组细胞周期依赖性蛋白Cyclin-D1及其激酶CDK4 的表达水平分别较对照组下降46.82±3.14%和32.86±2.75%（P0.05），提示PSMB5 基因沉默可能通过下调细胞周期依赖性蛋白Cyclin D1及其激酶CDK4的表达水平，从而影响NSCs 增殖潜能。结论：1. PSMB5 可能参与NSCs 增殖潜能的调控。2. PSMB5 基因沉默能够通过降低蛋白酶体活性，下调细胞周期依赖性蛋白Cyclin- D1 及其激酶CDK4 的表达，从而抑制NSCs 增殖潜能。关键词：神经干细胞；蛋白酶体；PSMB5；基因沉默；增殖EffectofPSMB5ontheProliferationofNeuralStemCellsAbstractObjective:Toexplorethemechanismofneuralstemcells(NSCs)proliferativepotentialis decreasedwiththeincreasingagebyRNAinferenceandobservedtheeffectof20S proteasomebeta-5subunit(PSMB5)onproliferationofNSCs,whichwouldfurther providenew ideas fortreatingneurodegenerativediseases.Methods:1.Differentagingsubventricularzone(SVZ)NSCsofmiceforcultruinginvitro, whichareEmbryonic14days(E14),Postnatalday(P0),Postnatal30days (P30),Postnatal90days(P90),Postnatal540days(P540).DifferentagingNSCsofmice for cultruinginvitro,the proliferationcapacityinthedifferentagingNSCswere observed bytheformationrateofneurosphere.2.ExtracttheE14,P0,P30,P90,P540mouseSVZ p