胆绿素对顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡保护作用及机制探讨word论文.docxVIP

英文缩略语对照表英文缩写英文全称中文全称CDDPcis-Diamminedichloroplatinum顺铂AKIAcutekidneyinjury急性肾损伤BVBiliverdin胆绿素HO-1Hemeoxygenase-1血红素氧合酶-1BVRBiliverdin reductase胆绿素还原酶BRBilirubin胆红素ROSReactiveoxidespecies活性氧自由基NONitricoxide一氧化氮PI3KPhosphatidylInositol3-Kinase磷脂酰肌醇3 激酶AktProteinkinaseB蛋白激酶BmRNAMessengerRNA信使RNART-PCRReversetranscriptionpolymerasechain reaction逆转录聚合酶链式反应NRK-52ERatkidneyproximaltubularepithelialcell大鼠肾小管上皮细胞胆绿素对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制探讨华中科技大学同济医学院附属同济医院肾内科硕士研究生：吕倩硕士生导师：姚颖教授摘要目的探讨胆绿素对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及其可能的作用机制。方法首先利用不同浓度的顺铂(5,10,20,30,40, 50,60,70,80,90, 100μmol/L)诱导NRK-52E细胞凋亡，采用流式细胞术检测细胞凋亡率，同时采用CCK8检测细胞存活率。然后将NRK-52E细胞分为正常对照组、顺铂组、胆绿素+顺铂组，正常对照组不作任何处理，顺铂组给予50μmol/L顺铂刺激24h，胆绿素+顺铂组先用30μmol/L的胆绿素预处理细胞30min，再给予50μmol/L顺铂刺激24h，比较各组间细胞的凋亡率与存活率，BVR和HO-1 的mRNA水平及BVR、HO-1、TotalAkt、p-Akt、cleavedcaspase3、pro-caspase3、Bax和Bcl-2 的蛋白表达水平。结果顺铂能诱导NRK-52E细胞凋亡；随着顺铂浓度的增加，凋亡率逐渐增加，至50μmol/L的顺铂刺激24h时凋亡率达到高峰，之后逐渐下降。而CCK8提示随着顺铂浓度的增加，细胞存活率逐渐下降。与正常对照组相比，顺铂组凋亡率明显增加(p0.01)、细胞存活率下降(p0.05)；BVR、HO-1 的mRNA水平升高(p0.05)；BVR、HO-1、p-Akt、cleavedcaspase3、Bax的蛋白水平明显较高，Bcl-2蛋白水平明显较低（p0.05）。与顺铂组相比，胆绿素+顺铂组凋亡率下降(p0.05)、细胞存活率增加(p0.05)；BVR和HO-1 的mRNA水平下降(p0.05)；BVR、HO-1、p-Akt、cleaved caspase3和Bax 的蛋白水平明显降低，Bcl-2蛋白水平明显升高（p0.05）。结论顺铂能诱导NRK-52E细胞凋亡。胆绿素能减少顺铂诱导的细胞凋亡，其保护作用可能是通过胆绿素-胆红素氧化还原系统不断消耗氧自由基，减少顺铂通过氧化应激诱导细胞损伤来实现。顺铂诱导BVR酪氨酸磷酸化及HO-1的高表达，可能是细胞受外界损伤时自我保护的一种机制，主要是通过激活PI3K/Akt 途径发挥作用。关键词：胆绿素顺铂细胞凋亡胆绿素还原酶血红素加氧酶-1Theprotectiveeffects andmechanismsofBiliverdinonrenaltubularepithelialcellsDepartmentofNephrology, TongjiHospital, TongjiMedicalCollege, Huazhong University ofScienceandTechnologyCandidate:LvQian Supervisor:Prof. YaoYingAbstractObjectiveThestudyaimstoinvestigatetheprotectiveeffectsandthemechanismsof biliverdinagainstcisplatin-induced apoptosisofNRK-52Ecells.MethodsFirstly,NRK-52Ecellswereadministratedwithdifferentconcentrationsof cisplatin(5,10,20,30,40,50,60,70,80,90,100μmol/L),theNRK-52Eapoptosis ratewasevaluated byflowcytometryandsurvivalratewasassayed byCellCounting Kit-8(CCK-8).Next,wedividedNRK-52Ecellsintot