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肺癌细胞系 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因甲基化及对表达的影响研究研究生刘晶晶导师胡瑞成 主任医师中文摘要目 的：研究A549（肺腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系）的PRDM2、PRDM5、 PRDM16基因甲基化状态及其对基因表达水平的影响。方 法：体外培养 A549（肺腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系），并以 HBE(正 常支气管细胞系)作为对照细胞系，用 MSP 检测 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因的甲基 化状态，利用 RT-PCR 检测 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因的 mRNA 表达水平，利用 Western-blot 检测 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因的蛋白表达水平，用不同浓度梯度 的去甲基化药物（5-aza-2dc）对各肺癌细胞系进行去甲基化处理，观察处理前后细 胞的生长曲线变化并检测 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因甲基化状态的变化及 mRNA 和 蛋白质表达水平的变化。结 果：1．A549（肺腺癌细胞系） 中 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因存在高甲基化，HTB-182（肺鳞癌细胞系）中 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因存在高甲基化，HBE(正常支气管上 皮细胞系) 中 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因存在低甲基化。2．经过不同浓度的去甲基化药物（5-aza-2dc）处理后，A549（肺腺癌细胞系） 中 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因甲基化程度逐渐依次减弱， HTB-182(肺鳞癌细胞系)中 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因甲基化程度逐渐依次减弱，HBE(正常支气管上皮细胞系) 中 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因甲基化程度无明显变化。A549（肺腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系）中随着去甲基化药物浓度的增 加，PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因的甲基化程度逐渐减弱，mRNA 及蛋白表达水平逐渐 上升，而在 HBE(正常支气管上皮细胞系)中随着去甲基化药物浓度的增加，mRNA 及 蛋白表达水平无明显变化。3.MTT 结果显示，经过不同浓度的去甲基化药物（5-aza-2dc）处理后，A549（肺 腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系）增殖抑制与去甲基化药物（5-aza-2dc）的 浓度呈正相关，5-aza-2dc 对 HBE(正常支气管上皮细胞系)的增殖抑制没有表现出明3显的效应。结 论：A549（肺腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系）中 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因 都存在甲基化，而且基因的甲基化导致了 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因的 mRNA 及蛋 白表达水平的下降，去甲基化药物（5-aza-2dc）能够逆转 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因的甲基化状态并能恢复 PRDM2、PRDM5、PRDM16 基因的 mRNA 及蛋白表达水平。[关键词] PRDM ；肺癌；甲基化；表观遗传学；基因表达；发病机制4Expression and methylation of PRDM2、PRDM5、PRDM16gene in lung cancer cell linesABSTRACTObjectiveIn order to study of expression and methylation status of PRDM2、PRDM5、 RDM16 gene in A549 (lung adenocarcinoma cancer cell lines), HTB-182 (lung squamous cell carcinoma cell lines).Methods Cultured A549 (lung adenocarcinoma cell lines ), HTB-182 (lung squamous cell carcinoma cell lines) in vitro,with HBE (normal bronchial cell lines) as control celllines, we detect methylation state of PRDM2、PRDM5、PRDM16 gene by MSP , detectmRNA expression level of PRDM2、PRDM5、PRDM16gene by RT-PCR , detect protein expression level of PRDM2、PRDM5、PRDM16gene by Western-blot test；with differentconcentration gradientsm