肺炎支原体lamps激活nrf2及其对ho-1和nqo1表达的影响word论文.docxVIP

TLRtoll-like receptorToll 样受体TrisTris-(hydroxymethyl) aminomethan三羟甲基氨基甲烷3肺炎支原体 LAMPs 激活 Nrf2 及其对 HO-1 和 NQO1表达的影响硕士研究生：谭田平导师：朱翠明 教授中文摘要目的：肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，Mp）感染所引起的一系列 炎症反应很大程度上是其细胞膜上的脂质相关膜蛋白（lipid-associated membrane proteins, LAMPs）所致。本研究旨在探讨 MP LAMPs 能否激活人单核细胞系 THP-1 中的核因子 NF-E2 相关因子 2（Nuclear factor erythroid 2-related factor 2， NF-E2 - related factor2，Nrf2），诱导血红素氧合酶-1（Hemeoxygenase，HO-1） 和醌氧化还原酶（NADPH: quinine oxidoreductase，NQO 1）的表达。方法：培养 Mp M129 菌株至对数生长期，离心收集沉淀，抽提 LAMPs， BCA 法测定 LAMPs 浓度。体外培养 THP-1 细胞，CCK-8 检测 LAMPs 的细胞毒 性；Western blot 检测 LAMPs 刺激 THP-1 细胞表达 HO-1 及 NQO1 的剂量依赖 性及时间依赖性；比色法分析 HO-1 酶活性改变情况；Western blot 及免疫荧光技 术检测 LAMPs 刺激 THP-1 后 Nrf2 在细胞核及胞浆中的表达以了解 Nrf2 的核转 位。实时定量逆转录 PCR（qRT-PCR）检测 LAMPs 刺激 Nrf2 siRNA 预处理的 THP-1 细胞 HO-1 和 NQO1 mRNA 的表达水平。结果：1. LAMPs 的浓度为 1.029mg/mL.2. 用 CCK-8 检测 LAMPs 对 THP-1 细胞的毒性，结果发现 PBS 组和各浓度LAMPs 作用组 450nm 波长光吸收值差异无显著性（P＞0.05）。3. LAMPs 可刺激 THP-1 细胞表达 HO-1 和 NQO1，且 NQO1 表达水平与 LAMPs 浓度呈剂量依赖性，HO-1 的表达在 LAMPs 浓度为 0~10μg/mL 范围内先 上升后递减，5.0μg/mL LAMPs 刺激表达的 HO-1 最高。4. HO-1 和 NQO1 的蛋白表达随 LAMPs 刺激时间均呈先上升后下降的趋势，4作用 12h 表达水平最高。5. 5.0μg/mL 的 LAMPs 作用 THP-1 细胞 12h 后 HO-1 酶活性为（1.278±0.171） nmol/mg/h，较 PBS 组显著增高（P＜0.01），与 LPS 处理组差异无显著性（P＞ 0.05）。6. LAMPs 刺激 THP-1 细胞，胞浆内 Nrf2 表达水平逐渐减少，而细胞核内蛋 白表达逐渐增高。7. Nrf2 siRNA 可降低 THP-1 细胞 Nrf2 mRNA 的表达。LAMPs 刺激 Nrf2 siRNA 预处理的 THP-1 细胞，HO-1 的 mRNA 表达水平显著减少，NQO1 mRNA 表达水平无明显变化。结论：Mp LAMPs 可诱导人 THP-1 细胞表达 HO-1 和 NQO1。Mp LAMPs 刺激 THP-1 细胞表达 HO-1 受 Nrf2 调控，Nrf2 调控 NQO1表达的作用不明显。关键词：肺炎支原体；脂质相关膜蛋白；血红素氧合酶-1; 醌氧化还原酶-1；核因子相关因子-2;本硕士学位论文受湖南省自然基金项目（NO：14JJ2090） 及湖南 省研究生创新课题（CX2012B384）资助。5The lipid-associated membrane proteins derived from Mycoplasma pneumoniae LAMPs activate Nrf2 and effect the expression of HO - 1 and NQO1ABSTRACTObjectives A series of inflammatory responses caused by Mycoplasma pneumoniae largely depend on the lipid-associated membrane proteins (LAMPs). This study was to investigate the activation of nuclear transcription factor 2 (NF - E2 - related factor2, Nrf2) and the expressi