第二章食用菌三级菌种制作技术方案培训.ppt

接种时注意： 接种过程应在酒精灯旁进行。 每瓶原种接栽培种10～15袋(两头接种)或50瓶左右。 接种用具使用前表面消毒，火焰灭菌。 接完种后，据接种量确定封口松紧度。 培养：同原种。 三级菌种生产的工艺流程 四、菌种污染原因及防止措施 （一）常见杂菌种类：细菌、酵母菌、放线菌和霉菌。 一、母种制作技术 培养基的概念 常用的母种培养基配方 母种培养基的制作 （一）母种培养基的制备 1.培养基的概念 培养基是按照食用菌生长繁殖所需要的各种营养，用人工方法配制而成的营养基质。 2. 母种培养基配方(g/1000ml) 除配方1，其它均需加入KH2PO43克，MgSO41.5克，VB12片。 编号 土豆 棉籽皮 木屑 发酵料 麸皮 葡萄糖 琼脂 蛋白胨 1 200 20 20 2 200 20 20 3 100 100 50 20 20 2-10 4 100 100 50 20 20 5 5 200 20 20 5-10 3.母种培养基的制作 PDA培养基的制作过程： 煮土豆，取滤液。开锅后，文火煮30min，适当搅拌，使营养充分溶出。 补足水，加药品溶化。琼脂溶解较慢并易溢锅，烧开后减小火力并搅拌1min左右。 分装试管。常用试管为18mm×180mm，每管约装培养基8-10ml。加棉塞后3个一把绑好。 高压灭菌。在1.1-1.2kg/cm2压力下灭菌30-40min。灭菌程序：放入物品，拧紧锅盖加热，当压力达到0.5kg/cm2时，排出冷空气，关闭放气阀。压力上去后记时，维持所需时间。 摆斜面。灭完菌后，锅体自然冷凉，压力降到0.5kg/cm2以下时，缓慢放气，气排尽后取出试管，趁热摆斜面，40℃以下即可凝固。 母种培养基制作流程 （二）菌种组织分离法 组织分离的概念、种类和特点 组织分离的方法 1.组织分离的概念、种类和特点 概念：是指在双核菌丝的组织上切取一块组织，使其在培养基上萌发而获得纯双核菌丝体的方法。称作原始母种。 种类：据切取组织的来源，分为子实体组织分离、菌核、菌索组织分离和基内菌丝组织分离。 特点：简单易行；为无性繁殖。 2.平菇子实体组织分离方法 培养基制备。 种菇选择：是指用来进行组织分离的子实体。要选择适宜出菇期出菇早、出菇整齐、形态正常、无病虫害、产量高的栽培袋，从上选择肥大、肉厚、6成熟的幼嫩子实体，切去多余菌柄。 接种场地消毒。 种菇处理：表面消毒。 接种过程：双手表面消毒，把种菇带入接种箱，点燃酒精灯，种菇表面消毒后从中间纵向撕开，用无菌小镊子夹取菌柄、菌盖交界处的菌肉，迅速放入培养基上，塞上棉塞。特殊种类：灵芝、金针菇、鸡腿菇等。 培养。适宜条件下，2-3天组织块上即萌发出菌丝，8-10天可长满。期间要检查，从中选留无污染、菌丝洁白浓密、长速正常的菌种。 基内菌丝组织分离以及菌核和菌索的组织分离过程类似，只是所取部位不同。 原始母种还可转接扩繁3-4次，以增加母种量。 长满后暂时不用的母种要置于2-5℃下冷藏。 （三）母种的扩大 培养基的制备（同前） 接种场地的消毒灭菌（同前） 母种的扩大 培养 3.母种的扩大 要严格无菌操作。母种试管表面消毒，然后靠近灯焰用接种钩将母种横切成若干份，再用接种铲将横切的母种分成2-3份，取一份带1～2mm厚的培养基放入新的培养基斜面上。 4.培 养 在适宜条件下培养。2-3天后，检查菌丝的生长及杂菌污染情况，若在接种块或培养基表面上出现独立的小菌落或奶油状小点，即为污染，应立即淘汰。 二、原种制作技术 （一）原种培养基的制备 （二）原种的制作 （一）原种培养基的制备1.常用原种培养基配方(%) 麦粒预处理：冷水浸泡12小时后水煮，开锅后文火20min左右，麦粒煮透，胀而不破，用水冷却后沥干表面水分，拌入石膏即可。 编号 麦粒 棉子皮 木屑 麸皮 玉米面 蔗糖 石膏 1 98 2 2 65 33 2 3 77-87 20-10 1 2 4 82 10 5 1 2 5 41 41 15 1 2 6 82 15 1 2 2.原种培养基制备 选定配方。分别称取各物质。 加水拌料。含水量约60%～65%，料水比约1:1.3～1.5。关键是拌匀，用量少的水溶性物质要先溶于水，再拌入料中。 装瓶。常用容器为750ml罐头瓶或菌种瓶，每瓶装干料2.5～3两。料要装匀，松紧适度，装至瓶肩下1cm处，料面压平。 打洞封口。擦净瓶口，中央打直径2cm的孔至瓶底。用两层报纸和一层聚丙烯膜封口。打洞可增加料底透气性。 灭菌：高压灭菌或常压灭菌。 常压灭菌：视灭菌量，需8～10h以上。注意：一是培养料量要适中，物品排列合理，保证蒸汽流通。二是大火猛烧，防止压力忽高忽低。三是灭菌后闷4～6h再出锅。 高压灭菌：1.4～1.5kg/cm2压力下灭1.5～2h，压力不稳或压力低时要