第四章生物化工产品的开发及生产技术方案培训.pptVIP

(五)、柠檬酸的深层发酵工艺 1 柠檬酸发酵的原料 原料 糖质原料和石油烷烃。 糖质原料包括 薯类：甘薯、薯干、木薯、木薯干、马铃薯、薯渣。 谷类：玉米、小麦、面粉、大米。 淀粉：谷类与薯类加工的淀粉。 砂糖：白砂糖、赤砂糖、糖蜜。 淀粉糖：淀粉水解糖(单糖、双糖、糊精、葡萄糖母液) 果实，粮食加工下脚料：各种含糖果实、糖食加工的下脚料等。 石油烷烃原料包括正烷烃、乙酸、乙醇等 淀粉水解糖的制备 淀粉质原料是发酵工业常用的原料，大多数发酵生产菌不能直接利用或仅微弱利用淀粉，因此淀粉质原料必须转化为葡萄糖等可发酵性糖，才能被生产菌利用。 工业生产将淀粉水解为葡萄糖的过程称为淀粉的糖化，所制得的糖液称为淀粉水解糖 碳源：黑曲霉能利用的碳源很多，淀粉和二糖，单糖大多能利用。从生产角度看，葡萄糖、蔗糖、糊精是最好的碳源。但为了降低成本，多用廉价的甘薯、玉米、小麦及其淀粉、糖蜜。高糖浓度是柠檬酸深层发酵的特征，薯干粉深层发酵，粉浆浓度可达16－20％。淀粉质粉浆浓度25%。 2 培养基 生理酸性氮:（NH4)2SO4, （NH4)3PO4 （NH4)2HPO4 （NH4)Cl （NH4)2CO3 生理碱性氮:NaNO3, KNO3 LiNO3 CaNO3 有机氮:麸皮、米糠、蛋白胨、氨基酸、尿素等。 氮源：柠檬酸发酵中的氮源有 氮源是黑曲霉合成细胞物质和代谢调节的重要物质，特别是细胞中铵离子浓度的升高，能解除ATP和柠檬酸对磷酸果糖激酶的反馈抑制，有利于柠檬酸的生成与积累。在柠檬酸生产中，黑曲霉偏好生理酸性氮[如（NH4)2SO4 ]，酸性氮中的铵离子被利用后，使培养基变酸，可以使发酵中的黑曲霉生长阶段结束，转入产酸阶段，pH下降到较低水平有利于柠檬酸的积累，所以铵盐即可以调节代谢，也可以控制pH。 无机盐：无机盐是黑曲霉生长和柠檬酸发酵不可缺少的物质，具有构成菌体，促进代谢，促进产酸的作用。 我国采用诱变方法改良的菌株耐金属离子，原料与水可不经处理用于发酵。采用薯干粉、马铃薯、木薯和糖蜜原料发酵，其中P、K、Mg、S已够黑曲霉生长，不需专门添加。 要求 KH2PO4 KCl MgSO4.7H2O Zn2＋ Mn2＋ Cu2＋ S Fe2＋ ％ ％ ％ mg/L 深层 0.05-0.5 0.01-0.03 0.01-0.05 0.3 0.2 0.5 0.07 0.2 发酵 黑曲霉对无机盐及微量元素的要求 镜检：菌丝粗壮，结成菊花状小球体，无异味，无杂菌。 pH：2.0-2.5 酸度：0.5-2.0% 柠檬酸含量：0.5g/dl 种子质量要求： 3 柠檬酸深层发酵工艺流程（薯干原料） 原始菌种 实罐灭菌 预处理 培养基配制 原料 实罐液化 粉碎 无菌空气 麸曲菌种 空气净化系统 空压机 种子罐 试管斜面 环境空气 过滤 发酵 连消 发酵成熟醪 去柠檬酸提取工段 代表菌种：Co827、γ-130、T419 液体深层发酵工艺 三级过滤 ↓ 黑曲霉 ↓ 原料,配料 ↓ 灭菌 空气 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 无菌空气 柠檬酸（盐） Ⅳ Ⅴ 无菌空气制备和有氧发酵系统（气升式发酵罐） 生产实例工艺说明 菌种：Co827 麸曲菌种：制法同前 种子罐培养基：干薯干粉16-20%，（NH4)2SO4 0.5%，0.1MPa蒸汽灭菌30min，接入1000ml三角瓶麸曲菌种20-50只（根据发酵罐容积定）。35±1℃培养16-24h。 发酵罐培养基：干薯干粉16-20%， 0.1%的α-淀粉酶（中温），115℃灭菌10－15min，培养温度35±1℃，通风量0.08-0.15m3/m3.min（视接种方式及培养情况而定）。 温度控制 黑曲霉属嗜热菌，最适生长温度33－37℃，生产中温度控制在35±1℃。若采用孢子接种，在孢子发芽和菌球体形成阶段，可采用40℃高温培养，促进其发育，进入产酸期再降到35℃左右。 pH控制 黑曲霉柠檬酸生产菌发育适宜pH3－7。一般在生产中，在菌种生长期，pH维持在4.5(有利于糖化）。而柠檬酸积累时，即产酸期最适pH2.0-3.0。pH3.0以上易产生草酸。采用薯干发酵生产柠檬酸，初始pH不调节，为自然pH。 接种量 孢子接种量与产酸的速率成正比关系，随着孢子接种量的增加，柠檬酸的产率也提高。 溶解氧的控制 黑曲霉的柠檬酸产生菌属于严格