22 基因结构与功能分析技术PPT.pptxVIP

第二十二章;人类的多种疾病都与基因的结构或功能异常有关，因此，要阐明疾病发生的分子机制和进行有效的诊断与防治，均需首先揭示基因的结构与功能。 DNA序列测定 基因转录起点及其启动子的分析 基因编码序列的分析 基因拷贝数及其表达产物的分析 基因功能获得和/或缺失策略 随机突变筛选策略;第一节 基因结构分析技术;一、基因一级结构解析技术 ;Sanger双脱氧法测序原理;7;二、基因转录起点分析技术 ;三、基因启动子结构分析技术 ;第二节 基因表达产物分析技术;一、通过检测RNA而在转录水平分析基因表达 ;二、通过检测蛋白质/多肽而在翻译水平分析基因表达 ;第三节 基因的生物学功能鉴定技术;一、用功能获得策略鉴定基因功能 ;转基因技术（transgenic technology）是指将外源基因导入受精卵或胚胎干细胞（embryonic stem cell），即ES细胞，通过随机重组使外源基因插入细胞染色体DNA，随后将受精卵或ES细胞植入假孕受体动物的子宫，使得外源基因能够随细胞分裂遗传给后代。 ;转基因动物（transgenic animal）是指应用转基因技术培育出的携带外源基因，并能稳定遗传的动物，其制备步骤主要包括转基因表达载体的构建、外源基因的导入和鉴定、转基因动物的获得和鉴定、转基因动物品系的繁育等。转基因小鼠最为常见。 ;基因敲入（gene knock-in）是通过同源重组的方法，用某一基因替换另一基因，或将一个设计好的基因片段插入到基因组的特定位点，使之表达并发挥作用。 通过基因敲入可以研究特定基因在体内的功能；也可以与之前的基因的功能进行比较；或将正常基因引入基因组中置换突变基因以达到靶向基因治疗的目的。 ;基因敲入是基因打靶（gene targeting）技术的一种。基因打靶是一种按预期方式准确改造生物遗传信息的实验手段。除基因敲入外，基因打靶还包括基因敲除、点突变、缺失突变、染色体大片段删除等。 基因打靶与转基因技术均可用于基因功能研究，但二者的最大区别就是基因打靶能去除和/或替换生物体内的固有基因，而转基因技术则未去除或替换固有基因。目前，基因打靶已成为研究基因功能最直接和最有效的方法之一。 ;19;二、用功能失活策略鉴定基因功??? ;基因敲除（gene knock-out）属于基因打靶技术的一种，其利用同源重组的原理，在ES细胞中定点破坏内源基因，然后利用ES细胞发育的全能性，获得带有预定基因缺陷的杂合子，通过遗传育种最终获得目的基因缺陷的纯合个体。 ;22;是利用反义技术，在转录或翻译水平特异性阻断（或封闭）某些基因的表达（即沉默相应基因），然后通过观察细胞生物学行为或个体遗传性状表型的变化来鉴定基因的功能。