蛋白质及其标记教学教材.pptVIP

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2018-02-13 发布于天津
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蛋白质及其标记教学教材.ppt

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O-酰基异脲异脲 N-羟基硫代琥珀酰亚胺双砷染料-四半胱氨酸重组噬菌体的构建及应用 ?Angew. Chem. Int. Ed.,?2011, 50, 5873-5877 其他特殊标记方法：NTA荧光团缀合物探针由两部分组成，一部分为荧光基团，另一部分为螯合物，由金属离子与含有三醋酸根的叔胺类化合物组成（NTA）六组氨酸(His6 ) 识别结合 Ni2+：次氮基三乙酸（Ni2+:NTA) 蛋白质C端、N端、或肽链中间比双砷染料-四半胱氨酸体系通用 The term ‘‘click chemistry’’, originally brought up by K. Barry Sharpless at The Scripps Research Institute in 2001. K. Barry Sharpless and his co-workers have discovered and developed many widely used catalytic oxidation processes, the Sharpless reactions for asymmetric epoxidation, dihydroxylation, and aminohydroxylation of olefins （烯烃的不对称环氧化、双羟化和羟氨化反应）. The Nobel Prize, 2001 点击化学 Azide/Alkyne Cycloaddition L. Pauling. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1933, 19, 860-867; Huisgen, R. Angew. Chem. Int. Ed. 1963, 2, 633-696 Sharpless, K.B. et al. Angew. Chem. Int. Ed 2002, 41, 2596-2599; Meldal,M.J. et al. J. Org. Chem. 2002, 67, 3057-3064 1933- Dipolar nature of azide first recognized by Linus Pauling 1960- Mechanism of 1,3-dipolar cycloaddition of azides and alkynes pioneered by Rolf Huisgen 2001- Copper catalyzed 1,3-Dipolar cycloaddition by Sharpless/Meldal Strain-Promoted [3 + 2] Azide-Alkyne Cycloaddition Cu(Ⅰ)催化的端基炔和叠氮化物Huisgen 1，3-偶极环加成反应(CuAAC)，CuAAC虽有很高的区域选择性并且反应迅速，但是在终产物中会存在微量的不希望有的铜盐。由于铜的细胞毒性和伴随生理调节(attendant bioregulation)，铜催化的反应还未能直接应用于活体细胞中 Agard N J, Prescher J A, Bertozzi C R,J. Am. Chem. Soc. ,2004, 126,15046 环辛炔衍生物提高水溶性与反应速率 In vivo imaging Strain-Promoted [3 + 2] Azide-Alkyne Cycloaddition 无需铜离子的点击反应 Staudinger-Bertozzi反应 Saxon, E. Bertozzi, C.R. Science 287, 2007–2010 (2000). Staudinger ligation reaction scheme (azide-phosphine conjugation). Phosphine-activated proteins or labeling reagents react with azide-labeled target molecules to form aza-ylide intermediates that quickly rearrange in aqueous conditions to form stable amide bonds between reactant molecules. Chemoselectivity: phosphines and azides do not occur in cells, they react only with each other in biological samples, resulting in minimal backgroun