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④高压蒸汽灭菌法 在特定的设备灭菌锅里完成。 在121℃维持15~20min。含糖培养基115℃维持35min。培养基、多种器材和物料的灭菌。 影响加压蒸汽灭菌效果的因素: 1.灭菌物体的含菌量 2.灭菌锅空气的排除程度 3.灭菌对象的pH 4.灭菌对象的体积 5.加热与散热的速度 实验室所用高压蒸汽灭菌锅 2、低温的影响 低温对微生物生长的影响主要是通过降低酶反应速度使微生物的生长收到抑制。在低温下,微生物的代谢活力极低,生长缓慢或停止,但不致死,而是处于休眠状态,低温下的微生物一旦获得适宜的温度,即可恢复活性。 利用这一特性,各种冰箱成为生物实验中保存生物样品或试剂的重要手段。 一般冰箱的温度在4℃~零下18℃,可以用于保存一般的生物样品。而有的样品需要比较低的温度,甚至低达零下70℃,或更低(如使用液氮,可以达到零下196℃) 二、pH 不同的微生物要求不同的pH(P104表6-6)。常见的四大类微生物中,对pH的最适(范围)要求分别是,细菌:6.5 ~ 7.5(4 ~ 10);放线菌:7 ~ 8(5 ~ 10);霉菌:3 ~ 6(1.5 ~ 10);酵母菌:5-6(1.5-10)。 在废水生物处理中,pH一般在6.5~8.5。生物处理的主体是细菌,它要求pH略为偏碱。过高的pH会使原生动物呆滞,菌胶团解体,影响去除效果,而过低的pH,会使霉菌大量繁殖,造成污泥膨胀。 有机固体废气物的pH为5 ~ 8。堆肥初期pH下降至5以下,以后上升至8.5,成熟堆肥的pH在7 ~ 8之间。 微生物的生命活动也会改变环境中的pH。 微生物的生命活动也会改变环境中的pH。 在废水和污泥厌氧消化过程中,要控制好产酸阶段和产甲烷阶段的产量,pH很关键。通常pH应控制在6.6 ~ 7.6,最好控制在6.8 ~ 7.2之间。 pH较低的工业废水可用霉菌和酵母菌处理。 过高或过低的pH对微生物的影响: 1、影响蛋白质解离,从而影响细胞表面电荷,进而影响对营养物质的吸收。 2、影响营养物质的离子化,影响其进入细胞。 3、影响酶活性。 4、降低抗热性。 三、氧化还原电位 氧化还原电位( Eh)的单位为V或mV。各种微生物要求的氧化还原电位不同。一般好氧微生物在Eh为+100mV以上才能生长,适宜的Eh为300~400mV;兼性厌氧微生物在Eh为+100mV以上时进行好氧呼吸,在Eh为+100mV以下时进行无氧呼吸或发酵;专性厌氧细菌要求的Eh为 -200~-250mV。 氧化还原电位与氧分压和pH有关。氧分压越高,氧化还原电位越高; pH低时,氧化还原电位会下降。在pH相对稳定的条件下,可通过增加通气量提高环境中(培养基)氧分压,或加入氧化剂,从而增加Eh值;也可通过加入还原剂降低Eh值,如抗坏血酸、硫化氢、半胱氨酸、谷胱甘肽和二硫苏糖醇等。 四、溶解氧 根据氧和微生物生长的关系,可将微生物分为好氧微生物(专性好氧微生物和微好氧微生物)、兼性厌氧微生物和厌氧微生物(专性厌氧微生物和耐氧厌氧微生物)。 1、好氧微生物 专性好氧微生物:其生长必需氧; 微好氧微生物:在有少量氧存在的条件下生长最好。 大多数细菌、放线菌、霉菌、原生动物和微型后生动物都属于好氧微生物。 O2的作用: (1)氧作为好氧微生物呼吸最终电子受体;(2)参与甾醇类和不饱和脂肪酸的合成。 细胞含超氧化物歧化酶和过氧化氢酶,可以 抵抗在利用氧的过程中产生的有毒物质。 微生物只能利用溶解于水中的O2,即溶解氧(DO)。DO与水温、大气压等因素有关,温度越高,氧的溶解度越小。 2、对数期 细菌经过停滞期进入对数期,并以最大的速率生长和分裂,导致细菌数量以几何级数增加。 代时(G)-每繁殖一代所需要的时间 G=(t2-t1 )/ 3.322(lg Nx-lg N0) 特点: (1)细菌生长速度最快,代时最短。 (2)酶系活跃,代谢旺盛。 (3)菌体细胞成分均衡增加。 生产上广泛地用对数生长期细菌作“种子”,在科研上它常作为理想的实验材料。 3、静止期 由于营养物质消耗,代谢产物积累和pH等环境变化,环境条件逐步不适宜于细菌生长,导致细菌生长速率降低直至零,进入静止期。 特点: (1)细菌总数最大,即新生细胞数与衰亡细胞数相等; (2)细菌开始积累贮存物质,如异染粒、
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