第一章酶工程介绍与培训.pptVIP

影响酶催化作用的因素 1. 底物浓度的影响 υ S Vmax Km 1/2Vmax 矩形双曲线：一级反应；混合反应；零级反应。 底物抑制：有些酶在高底物浓度下，速度没有维持较高水平，反而下降的现象 第一章 酶 工 程 酶的催化特点及影响因素 3. 酶浓度的影响 υ=κ· [ E ] 底物浓度够高的条件下，酶催化反应速度与酶浓度成正比。 2. 产物浓度的影响 反馈调节作用：许多代谢途径的中间产物或终产物 是酶的变构剂，使酶变构从而影响其反应速度。 影响酶催化作用的因素 第一章 酶 工 程 酶的催化特点及影响因素 4. 温度的影响 在一定温度范围内，反应速度随温度升高而加快。 超过一定范围，温度的升高导致酶三维结构的变化，甚至变性，催化活性下降 5. pH的影响 T (pH) υ 影响酶催化作用的因素 第一章 酶 工 程 酶的催化特点及影响因素 当酶分子处于最适pH值反应介质中时，使酶促反应速度达到最大值。 6. 抑制剂(inhibitor)的影响 凡能降低酶催化反应速率的物质都称之为抑制剂 抑制剂与酶的必需基团（包括活性基团及辅基）结合，改变 其结构与性质，引起酶反应速率下降 抑制剂对酶有选择性，不包括酶蛋白的水解及变性失活作用 影响酶催化作用的因素 第一章 酶 工 程 酶的催化特点及影响因素 7. 激活剂(activator)的影响 （1）无机离子激活剂：Cl-,Br-,I-,Zn2+,Mg2+,Ca2+,Na+ （2）小分子有机化合物：抗坏血酸，半胱氨酸，谷胱甘肽 （3）生物大分子激活剂：激酶 影响酶催化作用的因素 第一章 酶 工 程 酶的催化特点及影响因素 酶的活力测定 酶活力 又称酶活性，是指酶催化某一化学反应的能力，酶活力可 用酶催化的某一化学反应的速率来表示。 化学反应的速率可用单位时间内底物的减少量或产物的增 加量来表示。 酶活力的大小可用在一定条件下，酶催化某一化学反应的 速度来表示，酶催化反应速度愈大，酶活力愈高，反之活 力愈低 第一章 酶 工 程 酶活力单位 酶活力单位是表示酶量多少的单位。 酶活力单位（U） 特定条件下（最适温度、pH），每1min 催化1μmol 底物转化为产物的酶量定义为1个酶活力单位 酶的活力测定 第一章 酶 工 程 国际酶活力单位—催量（kat） 1kat = 1mol/s = 60mol/min = 6×107U 在最适条件下，每秒钟催化1mol的底物转化为产物的酶量。（1972年国际酶学委员会） 酶活力单位 酶的活力测定 第一章 酶 工 程 酶的比活力 酶的比活力可用来表示酶制剂的纯度或活力的高低，是酶纯度的一个指标。在特定条件下，单位质量的酶（蛋白或RNA )所具有的酶活力单位数称为酶的比活力（specific activity）。 酶的比活力 = 酶活力（U）/mg（蛋白或RNA ) 酶的活力测定 第一章 酶 工 程 酶的转换数和催化周期 转换数（Kcat） 酶催化效率的指标，指每个酶分子每分钟催化底物转化的分子数 一般用每μmol的酶活力单位数 IU 来表示（min-1） 酶分子只有一个催化中心 催化中心活性等于摩尔催化活力 例如：单体酶 酶分子有n个催化中心 催化中心活性等于摩尔催化活力除以n 例如：寡聚酶 酶的活力测定 第一章 酶 工 程 催化周期 （T） T = 1 / Kcat 酶的催化周期为转换数的倒数，单位为毫秒(ms)或微秒(μs)。 指酶进行一次催化所需的时间。 酶的转换数和催化周期 酶的活力测定 第一章 酶 工 程 酶活性的测定要求测得的反应速度必须和酶的浓度有线性的比例关系，这也是检验酶反应和测定系统是否适宜、正确的标准。酶活力测定是通过“可视化”酶催化其特定底物为产物，可用终止反应法或连续反应法进行测定。 活力的测定方法 酶的活力测定 第一章 酶 工 程 酶反应进程曲线：纵坐标为底物或产物的变化量，横坐标为反应时间，曲线斜率表示反应速度。从酶反应进程曲线求得反应的初速度。 酶浓度曲线：纵坐标为反应速度，横坐标为酶量。通过酶浓度曲线，检验反应测定系统是否合适。 通常酶活力测定时，先制备酶反应进程曲线和酶浓度曲线 酶的活力测定 活力的测定方法 第一章 酶 工 程 酶活力与底物浓度、酶浓度、pH值、温度、激活剂和抑制剂 的浓度以及缓冲液的种类和浓度都密切相关。 底物浓度：一般选用底物的浓度[S]=100Km。 pH值：选用适宜的缓冲离子和离子强度、适宜的pH值缓冲系 统来