【发酵工程】第四章发酵工业无菌技术PPT.ppt

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4)泡沫 泡沫中的空气形成隔热层,对灭菌极为不利,可加入少量消泡剂 。 5)培养基中的微生物数量 培养基中微生物的数量与灭菌时间呈正比。 天然基质培养基、营养丰富或变质的原料中含 菌较多。 二、分批灭菌(实罐灭菌) 定义: 分批灭菌就是将配制好的培养基放入发酵罐或其他装置中,通入蒸汽将培养基和所用设备一起进行灭菌的操作过程,也称为实罐灭菌。 优点: 不需要专门的灭菌设备,投资少,设备简单,灭菌效果可靠,对蒸汽的要求较低。 用空气过滤器灭菌 并用空气吹干 夹套或蛇管排冷水,开启排气管阀,空气管通蒸汽,也可夹套内通蒸汽 达70℃左右 取样管 放料管 通蒸汽 120℃,1×105pa 保温 保温阶段,凡液面以下各管道都应通蒸汽,液面上其余各管道则应排蒸汽,不留死角,维持压力、温度恒定 罐压接近空气压力 向罐内通无菌空气 保温结束,依次关闭各排汽、进汽阀门 夹套或蛇管中通冷水 培养基降温到所需温度 1.灭菌工艺过程 分批灭菌包括升温、保温和冷却三个阶段。 升温、冷却两阶段也有一定的灭菌效果,考虑到灭菌的可靠性主要在保温阶段进行,故可以简单地利用式 ㏑(Nt/N0) = -kt 来粗略估算灭菌所需时间。 2. 灭菌时间的估算 例1:有一发酵罐内装40m3培养基,在1210C温度下实罐灭菌,原污染程度为每1ml有2×105个耐热细菌芽孢,已知1210C时灭菌速度常数k=1.8min-1,求灭菌失败机率为0.001时所需时间。 解:N0=40×106×2×105=8×1012(个) Nt=0.001(个) k=1.8(min-1) ㏑(Nt/N0)=-kt t=2.303/k[lg(N0/Nt)]=2.303/1.8[lg(8×1015)] =20.34(min) 由于升温阶段就有部分菌被杀灭,特别是当培养基加热 至1000C以上,这个作用较为显著,实际保温阶段时间比 计算值要短。 三、连续灭菌(连消) 定义: 连续灭菌就是将配制耗的培养基向发酵罐等培养 装置输送的同时进行加热、保温和冷却等灭菌操 作过程。 优点: 可以在比分批灭菌更高的温度下灭菌,保温时间 很短,减少营养物的破坏,提高发酵产率。 注意: 连续灭菌前要进行空罐灭菌,加热器、维持 罐及冷却器也应先进行灭菌。 1、工艺流程 喷淋冷却连续灭菌流程 喷射加热连续灭菌流程 薄板式换热器连续灭菌流程 2、灭菌时间的计算 ㏑(Ct/C0)=-kt t=2.303/k[lg(C0/Ct)] 式中:C0、Ct分别为单位体积培养基灭菌前、后 的含菌数。 例2. 某发酵罐内装40m3培养基,采用连续灭菌,灭菌温度为1310C,原污染程度为每1ml含有2×105个杂菌,已知1310C时灭菌速度常数为15min-1,求灭菌所需的维持时间。 连续灭菌时间的估算 解:C0=2×105(个/ml) Ct=0.001/(40×106)=2.5×10-11(个/ml) t=2.303/k[lg(C0/Ct)]=2.303/15×lg[(2×105)/(2.5×10-11)] =2.37 min 喷淋冷却连续灭菌流程 维持8~25min 预加热 110~130℃ 维持管子长度保证保温时间 急速升温 急速冷却 冷却段 加热段 四、分批灭菌与连续灭菌的比较 连续灭菌的优点:(适用于大型罐) 可采用高温短时灭菌,营养成分破坏少,有利于提高发酵产率; 发酵罐利用率高; 蒸汽负荷均衡; 采用板式换热器时,可节约大量能量; 适宜采用自动控制,劳动强度小; 可实现将耐热性物料和不耐热性物料在不同温度下分开灭菌,减少营养成分的破坏。 缺点: 对小型罐无优势,不方便,对设备要求高; 蒸汽波动时灭菌不彻底; 当培养基中含有固体颗粒或有较多泡沫时,以分批灭菌好,防止灭菌不彻底。 五、发酵培养基及设备管道灭菌技术 1、种子罐、发酵罐、计量罐、补料 罐等的空罐灭菌及管道灭菌 2、空气总过滤器和分过滤器灭菌 3、种子培养基实罐灭菌 4、发酵培养基实罐灭菌 5、发酵培养基连续灭菌 6、补料实罐灭菌 1、种子罐、发酵罐、计量罐、补料罐等的 空罐灭菌及管道灭菌 从有关管道通入蒸汽,使罐内蒸汽压力达0.147MPa,维持45min。 灭菌过程中,液位以上的阀门和边阀门打开排气,灭菌完毕后关闭,待罐内压力低于空气过滤器压力时,通入无菌空气保压0.098MPa。 2、空气总过滤器和分过滤器灭菌 排出过滤器中的空气,从过滤器

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