白芷香豆素类成分的提取分离和鉴定.docxVIP

白芷香豆素类成分的提取分离和鉴定二、实验目的1. 学习用有机溶剂提取香豆素类成分的方法。2. 学习用柱层析色谱分离香豆素类化合物的方法。三、实验操作（一）总提取物的制备取白芷生药粗粉200g，用石油醚-丙酮（4:1）回流提取3次，每次250ml，分别提取2,1,1h，合并提取液，回收溶剂至干，得总提取物月2.5g。（二）柱层析色谱分离取总提取物1.5g，用5g硅胶吸附，在25×4cm的色谱柱上干法上样，进行低压柱层析色谱。色谱条件：吸附剂：硅胶H 20g（薄层色谱用）洗脱剂：石油醚-丙酮 8:1，6:1，4:1，3:1各80ml。压力：0.5~0.7 kg/cm2收集：5~8ml/份用下述薄层色谱条件进行检识，将相同斑点的流分合并，用石油醚-乙酸乙酯（8:2）的溶剂重结晶1~2次，分别得到单体化合物，测定熔点。（三）鉴定1. 薄层色谱吸附剂：硅胶（薄层色谱用）展开剂：（1）石油醚-丙酮 8:2；（2）苯-乙酸乙酯 8:2样品：白芷总提取物，异欧前胡素，欧前胡素标准品：异欧前胡素，欧前胡素显色：紫外灯（365nm）下观察荧光。2. 光谱测定1H-NMR谱：用CDCl3作为溶剂。一、 实验目的 1.掌握连续回流提取法的原理和方法； 2.掌握重结晶的原理和方法实验原理 白芷为伞型科植物白芷的干燥根。具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的功能。白芷中的有效成分为香豆素类化合物。用单位白芷的提取物（其中主要是香豆素类化合物）制成的制剂对功能性头痛、白癜风的临床疗效较好。异欧前胡素和欧前胡素为白芷的主要有效成分。 常见的提取方法有：溶剂提取法、水蒸气蒸馏法、升华法。其中，溶剂提取法应用 最广。溶剂提取法的原理：根据相似相溶原理，选择与化合物极性相当的溶剂将化合物从植物组织中溶解出来，同时，由于某些化合物的增溶或助溶作用，其极性与溶剂极性相差较大的化合物也可溶解出来。溶剂提取法一般包括浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续回流提取法等，其实用反胃和特点各有所不同。连续回流提取法具有提取效率高、溶剂用量少等优点。 本实验利用连续回流提取法提取白芷中的香豆素。三、试剂与仪器 试剂：乙醇，白芷粗粉，石油醚，乙醚，蒸馏水，丙酮。 仪器：烧杯，圆底烧瓶，三角烧瓶，索氏提取器，电子天平，恒温水浴，硅胶薄层板，色谱缸，球形冷凝管，真空泵。四、 实验步骤与记录 ⑴．白芷中香豆素的提取 取白芷粗粉30g，置于索氏提取器中，加入95%的乙醇300ml，80℃恒温水浴回流2h，提取液减压浓缩至糖浆状。用丙酮溶解并转移至50ml三角烧瓶中，放置结晶，抽滤后，再重结晶，所得产品干燥称重，计算得率。 ⑵．产品的薄层色谱鉴定 色谱材料：硅胶薄层板 点样：产品，欧前胡素和异欧前胡素标准品。 展开剂：石油醚-乙醚1:1 显色：置紫外光灯（365nm）下，观察斑点颜色。 展开方式：预饱和后，上行展开。五、实验数据处理及结果 ①．索氏提取两个小时后得到棕色的澄明液体，真空抽提后得到深棕色的糖浆状浓稠液体。丙酮转移静置后析出淡黄色晶体，精制后得到白色晶体。 香豆素样品中含有欧前胡素和异欧前胡素两种物质，并且还含有其他两种未知物质，在紫外光照射下显紫色 ②. 产品为无色晶体。注意事项 抽滤操作要小心，以免倒吸。 问题讨论 1) 连续回流提取法的原理是什么？有何特点？ 答：原理：将装好药材粉末的滤纸袋中药粉高度应低于虹吸管顶部，自冷凝管家溶剂入烧瓶内，水浴加热。溶剂受热蒸发，遇冷后变为液体回滴入提取器中，接触药材开始进行浸提，待溶剂液面高于虹吸管上端时，在虹吸作用下，浸出液体流入烧瓶，溶剂在烧瓶内因受热继续气化蒸发，而被提取的药物被溶剂带入烧瓶内逐渐累积。 特点：不断循环利用提取药物的溶剂，可使溶剂的利用率提高 对比浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法和连续回流提取法的使用范围和特点 答：浸渍法 适用于对热不稳定的成分及含大量淀粉、树胶、果胶、黏液质中药的提取 特点：本法简单可行， 但浸出率低，如用水注意防腐 ?渗漉法 适用于贵重药材、毒性药材及高浓度制剂；也可用于有效成分含量较低的药材提取。 特点：溶剂利用率高，有效成分浸出完全，可直接收集浸出液，该法常用不同浓度的乙醇或白酒做溶剂，故应防止溶剂的挥发损失。 ?煎煮法 煎煮法适用于有效成分能溶于水，且对湿、热均稳定的药材。 特点：该法浸提成分范围广，但往往杂质较多，给精制带来不利，且煎出液易霉败变质。 ④回流提取法 适用于对热稳定的成分。特点： 提取效率高；溶剂消耗量大。 ⑤连续回流提取法 适用于对热稳定的成分。特点： 提取效率最