微生物学检验(第3版)2012肺炎克雷伯与痰液标本检查PPT.pptVIP

1 痰液和呼吸道标本的微生物检查及肺炎克雷伯菌培养鉴定 临床微生物与免疫学教研室 肺炎克雷伯菌革兰染色 肺炎克雷伯菌荚膜染色 肺炎克雷伯菌的菌落特征（血琼脂平板） 肺炎克雷伯菌的菌落特征（MAC） 肺炎克雷伯菌粘丝试验 8 目的要求 掌握呼吸道标本的细菌学检验和报告方法 掌握肺炎克雷伯菌的培养特征、主要微生物特性及鉴定方法。 了解呼吸道标本的采集方法。 9 器材和试剂 1、标本：痰液标本 2、菌种：肺炎克雷伯菌 3、培养基：血平板、中国蓝平板、克氏双糖斜面培养基、半固体培养基、微量生化管等。 10 4、试剂：氧化酶纸片、3%过氧化氢、革兰染色液、无菌生理盐水及生化管配套试剂。 5、其它 ：显微镜、培养箱、小试管、载玻片、接种针、接种环、酒精灯、火柴、非发酵菌生化编码表等。 器材和试剂 11 1. 鼻咽拭子 采集时，患者用清水漱口，对光而坐，头向上仰张大口，用压舌板轻压舌根，取无菌鼻咽拭子绕过悬雍垂，在鼻咽腔、悬雍垂后侧反复涂抹数次小心取出，避免接触口腔部其他组织。 2．咽拭子 将拭子用无菌生理盐水湿润，用压舌板轻压舌根，暴露整个口咽部。先用拭子轻擦扁桃体表面后弃去，再取1支湿润的拭子轻压扁桃体，擦取挤压出的分泌物，或擦取伪膜等病变部位。 标本的采集 12 13 3. 痰液标本 （1）自然咳痰法：受检者用清水溯口数次后，用力咳嗽自气管深部将痰咳出吐至无菌容器中。对痰量少或无痰等咳痰困难者，可雾化吸入45℃左右的10%氯化钠水溶液，使痰容易排出。对于幼儿，可轻轻压迫胸骨上部气管，使其咳嗽而取之。 标本的采集 14 （2）气管镜采集法：用气管镜在肺部内病灶处直接吸取标本，或用气管刷采取标本。 （3）气管或环甲膜穿刺法：主要用于厌氧菌培养。 标本的采集 15 革兰阳性细菌 革兰阴性细菌 正常菌群 α和γ链球菌、微球菌、表皮葡萄球菌、四联球菌、白喉以外的棒状杆菌、乳杆菌 除脑膜炎和淋病奈瑟菌外的其他奈瑟菌、其他嗜血杆菌 上呼吸道常见致病菌 化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、白色念珠菌 脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、百日咳鲍特菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌 下呼吸道常见致病菌 化脓性链球菌 、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、厌氧菌、放线菌、奴卡菌 脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、产气肠杆菌、嗜肺军团菌 痰液标本常见的分离菌 16 血平板 巧克力平板 中国蓝平板 鼻咽拭子 直接涂片染色检查 革兰染色 异染颗粒 初步报告 白喉棒状杆菌培养 菌落形态、涂片染色 初步报告 生化反应、血清学鉴定 检验程序 常规培养 百日咳杆菌培养 血清斜面培养基 鸡蛋培养基 鲍-金培养基 亚碲酸钾血平板纯培养 菌落形态、涂片染色 17 检验程序 18 1、肉眼观察：下呼吸道标本为痰液，选取脓血性的痰液用于细菌学检验。异常恶臭的脓性痰，常见于肺脓疡患者，而且可能与厌氧菌有关。痰液中有颗粒状、菌块和干酪样物质可能与放线菌病和曲霉菌感染有关。 痰液标本检验操作流程 19 2、涂片检查：挑选痰液中脓、血性部分涂片，干燥固定后，进行革兰染色镜检。 如发现形态典型、有特殊结构，初步可以确定所属菌属或种的细菌，可直接报告。 如查见革兰阳性葡萄状排列的球菌，可报告“痰液涂片查见革兰阳性球菌，形似葡萄状”； 痰液标本检验操作流程 20 如查见革兰阳性双球菌、矛头状、有明显荚膜时，可报告“痰液涂片查见革兰阳性双球菌，形似肺炎球菌”。 如不能直接确定菌属或种的细菌，可报告“痰液涂片查见革兰×性×菌”。如果痰片中均为鳞状上皮细胞，则应视为不合格标本。 痰液标本检验操作流程 21 3、分离培养： 1）痰液标本的前处理 A. 均质化法：加入等量的PH 7.6 的1% 胰酶溶液，放置35℃、90 min使痰液均质化； 痰液标本检验操作流程 22 B. 洗涤法：取无菌平皿4个，加入无菌生理盐水20ml ，将痰液标本放入第1个平皿中，用接种环用力震摇，将脓痰分散为小块悬浮于盐水内，将小块脓痰取出依次放入第2、3、4个平皿中重复以上操作。最后在第4个平皿收集脓痰小块，接种于平皿。同时接种未经洗涤的痰液标本，作为对照。 痰液标本检验操作流程 23 2）取经过前处理的痰液标本分别接种血平板、巧克力平板和中国蓝平板。巧克力平板置5%—10% CO2 环境培养，其他平板于普通环境35℃孵育18—24h 。根据菌落形态，细菌染色观察，进一步进行鉴定。 痰液标本检验操作流程 24 特殊菌的培养 1.结核分枝杆菌培养：无菌吸管加前处理标本2-3滴于罗-琴培养基35℃孵育