酵母发酵虎杖提取白藜芦醇技术初步研究.docVIP

酵母发酵虎杖提取白藜芦醇技术初步研究 　　摘要：对酵母发酵虎杖提取白藜芦醇的原料预处理方式、发酵工艺及提取方法等进行初步研究。结果表明，酵母固态厌氧发酵能有效地提高虎杖白藜芦醇的提取得率，适量添加纤维素酶和木聚糖酶能在一定程度上提高虎杖白藜芦醇得率。较佳的虎杖生物发酵提取白藜芦醇的工艺条件为：虎杖原料粉碎过１０目筛，发酵体系含水的质量分数为６５％，添加糖化酶和ＳＡＤＹ酵母的量分别占虎杖原料质量的０．１８％和０．３４％，厌氧发酵５ ｄ，发酵后采用体积分数为９５％的乙醇水溶液提取。 　　关键词：虎杖；白藜芦醇；酵母发酵；提取 　　中图分类号：Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８11423－4929-03 　　 　　Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｆｒｏｍ Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ ｂｙ Ｙｅａｓｔ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ 　　 　　ＰＥＮＧ Ｙｕａｎ－ｄｅ１，ＺＨＵ Ｚｕｏ－ｈｕａ１，ＬＩＵ Ｚｈｅｎｇ－ｃｈｕ１，ＤＵＡＮ Ｓｈｅｎｇ－ｗｅｎ１，ＬＩ Ｚｈｉ－ｍｉｎ１，ＹＡＮ Ｌｉ１， 　　ＱIN Ｌｉａｎ－ｃｈｅｎｇ２，ＷＥＩ Ｊｉｅ－ｚｈｏｎｇ２ 　　 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ， ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｆｒｏｍ Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｂｙ ｓｏｌｉｄ ｓｔａｔｅ anaerobic ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｙｅａｓｔ． Ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｓｅ ａｎｄ ｘｙｌａｎａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｃｏｕｌｄ ａｌｓｏ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ， Ｐ． ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ ｓａｍｐｌｅ ｇｒｉｎｄｅｄ ｉｎｔｏ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｉｎｅｒ ｔｈａｎ １０ ｍｅｓｈ； Mａｓｓ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｗａｓ ６５％； Dｏｓｅ ｏｆ ｇｌｕｃｏａｍｙｌａｓｅ ａｎｄ ＳＡＤＹ， ０．１８％ ａｎｄ ０．３４％ ｏｆ Ｐ． ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ ｗｅｉｇｈｔ； Anaerobic ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ， ５ ｄ； Eｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ， ９５％ ａｌｃｏｈｏｌ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ； ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ； ｙｅａｓｔ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ 　　白藜芦醇是一类具有重要生物学作用的植物性化合物，具有预防和抗心血管疾病、抑菌、抗氧化、抗肿瘤等多种功能［１－３］，市场前景广阔。虎杖是蓼科多年生草本植物［４－６］，是目前提取白藜芦醇的首选天然植物［７］。研究虎杖中白藜芦醇高效提取技术对推动我国特色经济发展具有重要的意义。目前国内一般先采用有机溶剂提取白藜芦醇苷，再用酸、碱等去除苷上的糖使之转化为苷元，最终完成白藜芦醇的提取。该方法费时、难度大、成本高，而且存在污染环境的问题［８］。近年来国内科研人员开始利用酶法［９－１２］、超临界ＣＯ２萃取［７］、微波［１３］等技术提取白藜芦醇。本研究利用酵母菌株进行虎杖固态发酵，再用有机溶剂提取，对发酵及提取工艺进行了初步研究，以期得到较高的白藜芦醇得率。 　　１ 材料与方法 　　１．１ 材料与仪器 　　１．１．１ 材料与试剂 虎杖、酵母ＳＸＸ及糖化酶干样由花垣恒远植物生化有限责任公司提供，虎杖干样粉碎成直径０．５～１．０ ｃｍ的小块备用；ＡＤＹ、SADY、ＳＡＧ、ＤＢＡ为市售干酵母；糖化酶为山东酶制剂厂提供；纤维素酶和木聚糖酶由湖南尤特尔生化有限公司提供，酶活力分别为２ ０００和５ ０００ Ｕ／ｍＬ；面粉购自当地市场。 　　１．１．２ 主要仪器设备 高效液相色谱仪、分析天平、精密ｐＨ计、恒温摇床、移液器、计时器、蒸汽爆破装置和高压灭菌锅等。 　　１．２ 实验方法 　　１．２．１ 酵母活化液制备 ３００ ｍＬ三角瓶中装入１００ ｍＬ水、４．２0 ｇ面粉、０．１７ ｇ酵母和０．０９ ｇ糖化酶，３０ 振荡培养２４ ｈ，备用。 　　１．２．