静脉灌注LPS对家兔的发热效应及肝蛋白的SDS-PAGE比较分析.docVIP

静脉灌注LPS对家兔的发热效应及肝蛋白的SDS比较分析 　　摘要：以静脉注射内毒素的方法建立了家兔发热模型，并以白虎汤的降温治疗作为反证，再运用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳比较和分析了ＬＰＳ引起的发热效应对家兔肝脏总蛋白表达变化的影响以及肝组织病理变化。结果表明，以１５ μｇ／ｋｇ体重的ＬＰＳ静脉注射家兔能很好地复制出动物温病模型，模型组、治疗组和对照组３组动物的肝蛋白表达均有各自的特异条带。所以，肝组织蛋白的表达变化可以作为动物温病研究与评价的生物学指标。 　　关键词：ＬＰＳ；发热模型；白虎汤；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ；蛋白差异表达 　　中图分类号：Ｓ８５３．１；Ｓ８５３．２１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11407－1416-04 　　 　　Ｐｙｒｏｇｅｎｉｃ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＬＰＳ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｉｎｔｏ Ｖｅｉｎｓ ａｎｄ Ｌｉｖｅｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｙ 　　ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ｉｎ Ｒａｂｂｉｔｓ 　　 　　ＺＨＡＮＧ Ｓｈｉ－ｄｏｎｇ１，ＬＩ Ｓｈｉ－ｈｏｎｇ１，ＷＡＮＧ Ｄｏｎｇ－ｓｈｅｎｇ１，ＧＯＮＧ Ｃｈｅｎｇ－ｚｈｅｎ２，ＬＩ Ｈｏｎｇ－ｓｈｅｎｇ１， 　　ＬＩ Ｊｉｎ－ｙｕ１，ＬＩ Ｘｉａ１，ＹＡＮ Ｚｕｏ－ｔｉｎｇ１ 　　 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｐｙｒｏｇｅｎｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＬＰＳ ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｉｎｔｏ ｖｅｉｎｓ ｗａｓ ａｎａｌｙｓｉｚｅｄ ａｎｄ Ｂａｉｈｕ Ｓｏｕｐ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｒｅｄｕｃｅ ｆｅｖｅｒ ａｓ ｃｏｕｎｔｅｒｅｖｉｄｅｎｃｅ． Ｔｈｅ ｃｈａｎｇｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ＬＰＳ ｆｅｖｅｒ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｂｙ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｆｅｖｅｒ ｍｏｄｅｌ ｃａｎ ｂｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｅｄ ｂｙ １５μｇ／ｋｇ ＬＰＳ ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｉｎｔｏ ｖｅｉｎｓ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ， ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ－ｗｅｉｇｈｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ， ＬＰＳ－ｉｎｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ Ｂａｉｈｕ Ｓｏｕｐ ｔｒｅａｔｅｄ ａｎｉｍａｌｓ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ， ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ， ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒ ｏｆ ａｎｉｍａｌ ｆｅｖｅｒ ｓｔｕｄｙ ａｎｄ ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＬＰＳ； ｆｅｖｅｒ ｍｏｄｅｌ； Ｂａｉｈｕ Ｓｏｕｐ； ＳＤＳ－ＰＡＧＥ； ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ 　　 　　温病为外感热病。现代医学中的传染性与感染性疾病多属温病范畴，其临床多以发热为主症［１］。温病动物模型的建立及试验研究对于揭示急性外感热病的本质以及提高其治疗手段都有重要的意义，而白虎汤作为清热生津、温病治疗的经典方，对高热症的实用价值被普遍公认［２，３］。本研究建立了家兔温病模型，并以白虎汤作降温治疗，用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳比较分析了家兔肝脏组织蛋白的表达变化，为温病研究提供了一定的理论依据。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　１．１．１主要试剂丙烯酰胺、Ｎ，Ｎ－甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、四甲基乙二胺、β－巯基乙醇、甘氨酸、溴酚蓝、考马斯亮蓝Ｒ２５０等购自Ｓｉｇｍａ公司；其余试剂均为国产分析纯。标准蛋白购自天根生化科技有限公司；脂多糖购自北京拜尔迪生物技术有限公司。白虎汤由石膏、知母、粳米、甘草组成，普通煎煮，并制成１ ｇ／ｍＬ的口服液。 　　１．１．２试验动物新西兰兔１８只，普通级，雌雄不限，单笼饲养，平均体重２．０ ｋｇ，体重变异不超过平均体重的２０％，试验动物及饲料由中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物中心提供。试验前适应性饲养并测温３ ｄ，以适应试验环境与测温操作。 　　１．１．３仪器高速冷冻离心机，ＤＹＹ－６Ｃ型电泳仪，ＦＤ－１Ｂ－５０型冷冻干燥机，垂直电泳槽，脱色摇床，酸度计，分析天平等。 　　１．２温病模型的建立 　　将１８只兔随机分为３组，每组６只。其中Ａ组为对照，注射生理盐水；Ｂ组以１５ μｇ／ｋｇ ＬＰＳ静脉灌注；Ｃ组为１５ μｇ／ｋｇ ＬＰＳ静脉灌注，同时灌服白虎汤治疗，Ａ组、Ｂ组均灌服生理盐水。观察各组动物体征变化，并每０．５ ｈ记录肛温１次。于试验前连续测肛