毒理学指标及实验操作汇总.docxVIP

药物毒性试验指标1.急性毒性试验一、半数致死量（LD50）的测定 (一)目的:观察受试物一次给予动物后，所产生的毒性反应和死亡情况。 (二)动物分组和剂量 1.动物:一般用小白鼠8周龄，体重18---22g(同次试验体重相差不超过2g)大白鼠6~8周龄，体重120--150g，同次试验体重相差不超过10g。 2.受试物:溶于水的做成溶液，不溶于水的做成混悬液. (三)试验方法 1.剂量:一般选用3一5个剂量，各剂量间剂距根据受试物情况和预试结果而定。 2.给药途径和容积: 给药途径:应与临床试验的途径相一致。口服药物应灌胃给药，一、二类新药应采用两种途径给药，其中一种应为推荐临床研究的给药途径。水溶性好的药物还应测定静脉给药的急性毒性。 给药容积:小白鼠禁食(12~16小时)，不禁水，按体重计算:灌胃(ig)不超过0. 4ml/ 10g体重。大白鼠禁食(12~16小时)，不禁水、灌胃(ig)，不超过3ml/只。 3.测定LD50:将动物按体重随机分组，每组至少10只(雌雄各半)。给受试物后立即观察动物反应情况，每天观察一次连续观察七天。详细逐天记录动物毒性反应情况及死亡分布，并用适当的统计学方法(申报时应说明方法名称)计算出LD50值及95%可信限。 4.观察毒性反应:给受试物后应严密观察反应情况，并记录动物的外观、行为活动、精神状态、食欲(饲料消耗量)、大、小便及其颜色、被毛、肤色、呼吸、鼻、眼、口腔有无异常分泌物，体重变化以及死亡等情况。死亡动物应及时进行尸检，发现病变器官应做病理组织学检查。 若发现中毒反应或死亡率一与动物的性别有明显相关时，则应选择性别敏感的动物进行复试。 (四)试验报告和结果评价 应详细具体，包括试验日期、动物的规格、性别、数量、受试物来源及含量、试验方法。LD50值及其95%可信限，以及各剂量组的死亡率，或最大耐受量的值及其相当于临床剂量的倍数.详细报告实验过程中动物出现的中毒表现及致死症状，综合评价受试物毒性大小。二、最大耐受量（MTD）的测定 方法:受试物可用临床试验的给药途径，以动物能耐受的最大浓度，最大容积的剂量一次或一日内2~3次给予动物(小白鼠至少20只，雌雄各半)。连续观察七天，记录动物反应情况，以不产生死亡的最大剂量为最大耐受量。计算出总给予药量g/Kg(合生药量g/Kg表示)，推算出相当于临床用药量的倍数。 测定最大耐受量，同样也应严密观察动物毒性反应情况，要求与观察单次给药的毒性反应相同。2.长期毒性试验一、大鼠的长期毒性试验 (一)目的:观察连续重复给予受试物对大鼠所产生的毒性反应，首先出现的症状和严重程度，毒副反应的靶器官及其恢复和发展情况。确定无毒反应剂量，为拟定人用安全剂量提供参考。 (二)动物和材料 1.动物健康大白鼠(参见总则要求)，每组至少20只。如试验周期为三个月以上，应根据需要增加数量至每组30~40只。体重差异应不超过平均体重的20%。试验期在三个月内用6~ 8周龄大鼠。超过三个月。宜用5~ 6周龄大鼠，雌雄各半、随机分组，每笼不超过5只，雌雄分笼饲养，试验前至少观察一周，记录食量和体重等。 (三)试验方法 1.剂量和分组 (1) 一般设三个剂量组和一个对照组。高剂量组原则上要求使动物产生明显的或严重的毒性反应，或个别动物死亡。中剂量组应相当于药效学试验的高剂量.低剂量组略高于动物的有效剂量而不出现毒性反应。(2) 如果急性毒性试验结果毒性很低，测不出LD50。也未见明显毒性反应，可设高、低两个剂量组，高剂量组一般为拟用于临床剂量50倍以上(有困难时，可适当减少剂量)并应高于药效学试验之高剂量。(3)对照组的设置:如受试物为提取物(如浸膏)，对照物可考虑用常水;如含溶媒，对照物为溶媒;如含赋形剂，则对照物用赋形剂。如溶媒或赋形剂可能产生毒性时，则应另加一空白对服组(常水)。2.给药途径与方法 (1)给药途径与推荐临床的途径一致。口服药物应经口给药。临床用药途径为静脉注射时，可用其它适宜的注射途径代替。 (2)口服药大鼠一般用灌胃法，也可将受试物混在饲料、水中给予，但每只动物分笼饲养，采取适当措施，保证每只动物按规定剂量在一定时限内服入。(3)受试物最好是每周7天连续给予，如试验周期在90天以上，可考虑每周给药6天，每天定时给药。(4)给药容量一般为1 ~ 2ml/l100g体重，每周可根据体重情况调整给药量，但总量不宜超过5ml /鼠/次。各剂量组用等容量不等浓度给药。3.试验周期(1)长毒试验的给药时间应为临床试验用药期的二 ~ 三倍，最长半年。(2)若临床用药周期在1周以内者，长毒试验应为2周;2周以内者，应为四周;四周以上者，长期毒性试验的给药期一般为临床试验用药期的两倍以上。(四)检查项目 1.一般观察:进食量、体重、外观体征和行为活动、粪便性状等，发