米载体的构建及其药物基因的高效传递研究.doc

新型无机纳米载体的构建及其药物/基因的高效传递研究 【摘要】：纳米载体在药物/基因传递中具有特殊的价值和意义。纳米载体粒径大小在10～100nn,可将药物分子包裹其中或吸附在其表面,通过靶向分子与细胞表面特异性受体结合,在细胞摄取作用下进入细胞内,实现安全有效的靶向药物输送和基因治疗。无机纳米粒载体因具有生物安全、高效、价廉等优点,已成为近年来新型药物/基因传递系统研究的热点。本论文重点围绕新型无机纳米粒载体的构建及其在药物/基因传递中的应用开展研究,主要分为四个部分： 第一部分纳米载体在药物/基因传递中的应用研究进展 对纳米药物载体及基因载体的国内外研究现状进行了综述,主要内容包括：纳米载体的特点及制备新技术、纳米药物缓控释系统的优点、基因载体的分类与特点、非病毒纳米基因传递系统的优点、新型纳米载体在药物/基因传递系统中的应用进展、基于组织工程的三维支架以及软骨种子细胞的定向诱导分化研究进展等。文献综述为论文后续实验工作的开展奠定了基础。 第二部分新型多孔二氧化硅纳米粒在药物传递中的应用研究 以生物安全的硅胶为载体材料,运用纳米技术,自行研制出具有高效增溶、长效缓释作用的新型多孔二氧化硅纳米粒(Porous silica nanoparticles, PSNs)。分别选择水溶性药物水飞蓟宾葡甲铵(Silybin meglumine, SLBM和难溶性药物水飞蓟宾(Silybin, SLB)为模型药物,研究PSNs新载体在水溶性药物和难溶性药物72h高效长效制剂开发中的应用可能,为3天给药1次的高效长效新制剂开发提供技术支撑。 1.水溶性药物72h高效长效新制剂的研制：以水溶性药物水飞蓟宾葡甲铵)为模型药物,PSNs为载体,制备了水飞蓟宾葡甲铵72h高效长效制剂(3d-SLBM)。体外评价研究结果表明：3d-SLBM的主药含量为29.46 mg/50mg,载药量为58.91±0.39%,包封率为58.43±0.62%；体外释药特性研究结果显示,3d-SLBM中SLBM的释放适宜在低浓度的碳酸钠溶液中进行,72 h累积释放大于80%；体内药动学研究结果显示：比格犬口服3d-SLBM,高效液相法测定犬体内血药浓度,3d-SLBM的Tmax 24 h与参比制剂Tmax 0.5 h相比大大增加,3d-SLBM的MRT 38.89 h与参比制剂的MRT 7.31 h相比显著延长,显示出长效缓释特征；3d-SLBM中游离药物的相对生物利用度达到803.99%；体外溶出结果与体内吸收具有良好的相关性,体外溶出结果可以间接反映其体内质量；药效实验结果表明：3d-SLBM组小鼠血浆中AST(291.83±76.03 IU/L)和ALT(774.92±223.85 IU/L)值明显低于CCl4对照组(AST：901.00±174.32 IU/L,ALT：1997.58±335.08 IU/L),具有统计学意义(P0.01)。说明3d-SLBM的生物利用度高、保肝效果好。 2.难溶性药物72h高效长效新制剂的研制：以难溶性药物水飞蓟宾为模型药物,综合运用固体分散速释技术、亲水凝胶骨架缓释技术和PSNs长效缓释技术制备了水飞蓟宾72h高效长效制剂(3d-SLB)。体外评价研究结果表明：3d-SLB中SLB的释放适宜在低浓度的碳酸钠溶液中进行,72 h累积释放大于80%；体内药动学研究结果显示：比格犬口服3d-SLB,高效液相法测定犬体内血药浓度,3d-SLB的Tmax 24h与参比制剂Tmax 1h相比大大增加,3d-SLB的MRT 32.15 h与参比制剂的MRT 6.11 h相比显著延长,显示出长效缓释特征；3d-SLB中游离药物的相对生物利用度达到458.98%,体外溶出结果与体内吸收具有良好的相关性,体外溶出结果可以间接反映其体内质量；药效实验结果表明：3d-SLB小鼠血浆中AST(149.90±28.14 IU/L)和ALT(843.33±169.18 IU/L)值明显低于CCl4对照组(AST:901.00±174.32 IU/L,ALT：1997.58±335.08 IU/L),具有统计学意义(P0.01)。说明3d-SLB生物利用度高、保肝性能优越。 第三部分载基因纳米粒的制备及其在基因传递中的应用研究 选择生物安全的磷酸钙纳米粒(Calcium phosphate nanoparticles, CPNPs)和PSNs,制备载基因DNA-CPNPs和DNA-PSNs;通过对载基因纳米粒进行修饰,成功制备了多糖修饰的DNA-CPNPs和钙离子化DNA-PSNs;着重研究了DNA-CPNPs、多糖修饰的DNA-CPNPs、钙离子化DNA-PSNs 3 (?)中新型载基因纳米粒对干细胞的传递效果。 1.DNA-磷酸钙纳米粒的制备及其干细胞的