幻灯片1 - 南京大学化学实验教学中心.ppt

* LOADING School of Chemistry and Chemical Engineering, Nanjing University 化学化工学院 国家级化学实验教学示范中心 以能力培养为核心 ，知识传授、能力培养、素质提高全面协调发展。 综合化学实验 全面科学教育要求教学既传授科学知识和技术，更训练科学方法和思维，还培养科学精神和品德。 微透析取样-在线样品浓缩 -毛细管电泳联用分析方法的建立 * /实验目的/ 熟悉毛细管电泳、微透析技术和在线样品浓缩技术 的原理及实际操作 学习建立联用方法时应考虑的因素 /实验原理/ 微透析 微透析探针埋注在待测组织中， 灌流液用微量泵从入口处输入， 透析膜外小分子物质由于在膜 内外存在浓度梯度通过扩散进 入透析管内，被连续流动的灌 流液不断带出。 动态连续的取样方法 /实验原理/ 微透析 时间分辨 空间分辨 除去大分子的干扰 回收率低，通常低于20% /实验原理/ 毛细管电泳 利用待测化合物在毛细 管内在高压电场的作用 下电泳迁移速率的不同 将不同待测化合物分离 的高分辨率微分离技术。 使用紫外-可见吸收检测 检测灵敏度低， 检测限10-5~10-7M。 /实验原理/ 毛细管电泳 灵敏度低， 检测限 10-5~10-7M 微透析 回收率低 通常低于20% 在线样品浓缩技术 灵敏度匹配 /实验原理/ 毛细管充满高pH 背景电解质溶液 如硼砂缓冲溶液 将一溶解于低pH 缓冲溶液的样品 注入毛细管 A 施加正向电压,产生不 连续电解质区带OH- 在电场作用下迁移进入 样品区带，弱酸性组分 受到OH-离解作用带更 多负电以更快的淌度向 进样端迁移 B 阴离子被聚集在 样品区带与进样端 一侧的背景电解质 溶液的边界上， 中性组分随电渗流 一起向阴极迁移。 C 各组分在毛细管 区带电泳模式下 得到分离 D /实验步骤/ 建立一个动态pH汇合在线样品浓缩方法，将微透析取样 与毛细管电泳分析结合起来。在考察样品pH、背景电解 质溶液pH和样品区带长度等实验参数的影响的基础上， 优化出能分离和检测到由微透析取样得到的待测化合物 的一个联用分析方法。 /讨论与思考题/ 动态pH汇合法要求样品的pH值低于背景电解质溶液 的pH值，当实际样品的pH值较高时，可以采用加入 酸液的办法调节pH值。能否设计一个更简单的方案， 使得不用酸化样品亦能进行浓缩？ 微透析用于试管内的试验时，定量分析可以采用标准 加入法或校正曲线法达到。当将微透析用于活体分析 时，标准加入法或校正曲线法均不能使用，如何定量？ * * *