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金免疫技术 ; 金免疫技术方法学主要有金免疫组织化学染色技术和金免疫测定技术，前者包括金（银）免疫光镜染色技术和金免疫电镜染色技术；后者包括斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验等。;影响胶体金溶液稳定性的主要原因;③胶体界面的溶剂膜，当二固体间夹有一厚层液体时，这层液体膜有一个反抗二固体接近的排斥力。两个胶粒要进一步接近，只有克服它们之间的溶剂化膜的斥力才有可能，因此溶剂膜的斥力是使溶胶稳定的原因之一。;（2）胶体金的颜色和光吸收性：对同一种物质的水溶胶金颗粒来说，粒子大小不同，颜色亦不同，胶体金颗粒在5～20nm之间，吸收波长520nm，呈葡萄酒红色，20～40nm之间吸收波长530nm，液体为深红色，60nm的金溶液主要吸收波长600nm，金溶液呈兰紫色，若离心去掉较大的金颗粒，溶胶呈红色。根据这一特点，用肉眼观察胶体金的颜色或吸收峰波长大小可粗略估计金颗粒的大小（如表20-1所示） ;3.胶体金的制备 ;（2）操作要点 最常用的制备方法为柠檬酸盐还原法。 ①先配制HAuC14水溶液，加热至沸。②搅动下准确加入一定量的柠檬酸三钠（Na3C6H5O7·2H2O）水溶液。③继续加热煮沸一定时间。此时可观察到淡黄色的氯金酸水溶液在柠檬酸钠加入后很快变灰色，续而转成黑色，随后逐渐稳定成红色。全过程约2～3min。④冷却至室温后用蒸馏水恢复至原体积。通过改变柠檬酸三钠的用量可以制得不同大小的胶体金颗粒 ;4.胶体金鉴定;5.胶体金保存;2.技术要点;（2）蛋白质最适标记量的确定 将待标记蛋白作一系列稀释后各取一定量加入装有一定量胶体金的试管中，然后分别加入NaCl溶液，混匀后静置数小时，对照管(无蛋白)及加人蛋白量不足的管，溶液颜色由红变蓝;蛋白量足或超过的管保持红色不变，其中含蛋白量最低的一管即为稳定胶体金所必须的最适标记量。以此比例并增加10%-20%即为标记全部胶体金溶液所需的蛋白总量。 由于蛋白质溶液含盐量较高或形成聚合物极易影响标记过程，因此，标记之前最好将蛋白质溶液用低浓度的盐水透析数小时并高速离心除去聚合物。;（3）标记过程 在电磁搅拌下将1/10体积的合适浓度的蛋白质溶液加于胶体金溶液中，反应一定时间后加入 BSA并调整pH至8.5，放置室温继续反应数分钟。;（4）离心分离 离心条件视胶体金颗粒的粒径而异： 对5nm金颗粒可选用40000r/min离心1h；8nm金颗粒用25000r/min离心45min；14nm金颗粒用25000r/min离心30min，40nm金颗粒用15000r/min离心30min。 轻吸上清液，沉淀用含PEG或BSA的缓冲液悬浮，恢复原体积后再离心。如此洗涤2～4次。以彻底除去未结合的蛋白质。;三、免疫金的保存;第二节 金免疫测定;一、斑点金免疫渗滤试验;(二) 方法类型;(三) 技术要点;;2.操作要点;二、 斑点金免疫层析试验;(二) 方法类型 ;;2.竞争法 如图20-3所示, G处为金标抗体，T处包被标准抗原，C处包被抗免疫金抗体，测试时待测标本加于A端，若待测标本中含有待测抗原，流经G处时结合金标抗体，当混合物移至T处时，因无足够游离的金标抗体与膜上标准抗原结合，T处无棕红色线条出现，实验结果为阳性，游离金标抗体或金标抗体复合物流经C处，与该处的抗金标抗体结合出现棕红色的质控带，若标本中不含待测抗原，金标抗体则与T处膜上的标准抗原结合，在T处出现棕红色的线条，实验结果为阴性。;3．间接法 为了消除待测血清标本中大量的非特异性IgG与特异性IgG竞争结合金标记抗人IgG，降低了试验敏感性，胶体金间接免疫层析法测抗体常设计成反流免疫层析法(图20-4)。;; 测试卡分成可左右折叠的两部分，右面中央纵向贴有NC膜条为膜上包被有抗原线T，E处为含能与蛋白结合的有色染料的标本加样区，F处吸水材料；左面中央开有观察窗口B，C处固定有金标记羊抗人抗体，A、D处为吸水材料。测定时先将缓冲液加在D处层析至C处使金标物复溶，然后将标本加在E处使其与染料一起在膜的层析作用下向F端移动，若标本中有待测抗体存在，则与膜上抗原结合形成抗原抗体复合物，待有色染料延伸至膜上标记线G处时，在F处加缓冲液，合上测试卡，A处的强大吸水作用使膜上液体反向流动，标本中非特异性IgG及无关物向E处反向层析，随后而来的金标羊抗人抗体与抗原抗体复合物结合，出现棕红色线条。无棕红色线条出现则表明血清中无特异性抗体。该法有效地排除了非特异性抗体对测试的干扰。;（三）技术要点;2.操作要点 以双抗体夹心法为例，①将试剂条标记线一端浸入待测标本中2-5秒或在标本加样处加一定量待检标本，平放于水平桌面上；②5-20分钟内观察结果；③结果判断：出现一条棕红线质控条带为阴性，出现两条棕红线条带为阳性，无棕红线质控条