[医学]蛋白质化学3.pptVIP

第四节 蛋白质的性质 一、蛋白质分子的大小 （一）分子量单位为“dalton” 1 dalton=1.661X10-24g 1KD=1000 蛋白质分子量在6KD~1000KD （二）单纯蛋白质的分子量与氨基酸残基数目估算 蛋白质氨基酸残基数目=分子量÷110 说明： 1、蛋白质20种基本氨基酸平均分子量为138； 2、多数蛋白质中较小的氨基酸占多数，因此平均分子量接近128； 3、氨基酸以肽键相连，每形成一个肽键缩去一分子H2O（分子量18）； 4、因此氨基酸残基平均分子量取110 例如：牛胰岛素分子量为5733 则其氨基酸残基数目n n =5733 ÷110 =52(个） 实际上牛胰岛素分子由51个氨基酸残基组成。 二、胶体性质 1、蛋白质溶液是亲水胶体 2、透析和超滤 使蛋白质与小分子杂质分开 三、两性解离和等电点 1、两性解离 蛋白质是多价解离的两性电解质 2、等电点 （1）概念见P115 （2）特征 等电点时，蛋白质的净电荷为零，但总电荷量不一定最少。 蛋白质的等电点随缓冲液性质、离子强度等变化，描述等电点时须注明条件。 在水溶液中蛋白质的等电点一般偏酸，因羧基解离大于氨基解离。 等电点时，蛋白质的电导率、渗透压、粘度、溶解度等达最低值。 等电点沉淀法是分离蛋白质的方法之一。 蛋白质在纯水中的等电点称为等离子点，是特征性常数。等电点不一定等于等离子点。 三、电泳现象 1、电泳现象：带电粒子在电场中向与本身所带电荷相反的电极方向移动的现象。 2、电泳的分类： 根据电泳所用支持介质分为纸电泳、凝胶电泳、粉末电泳等； 根据电泳时不同蛋白质组分形成的形状分为： 自由界面电泳 区带电泳 圆盘电泳 3、蛋白质电泳技术 （1）聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) (poly-acrylamide gel electrophoresis) 由丙烯酰胺单体和甲叉双丙烯酰胺在催化剂TEMED作用下形成的凝胶。 蛋白质分子根据荷质比得以分离。 PAGE （2）SDS测定蛋白质分子量原理 蛋白质样品加入阴离子去污剂—十二烷基磺酸钠（SDS）处理。SDS可与蛋白质定量结合： SDS-蛋白质复合物表面覆盖相同密度的大量负电荷，掩盖了蛋白质分子本身的电荷差异； SDS-蛋白质复合物形状均为椭圆棒状。 SDS存在时，蛋白质分子的电泳迁移率与其本身所带电荷和分子形状无关，仅取决于它的分子量。 此时蛋白质的分子量的对数与其电泳迁移率成正比。 如首先用还原剂巯基乙醇打开二硫键，再用SDS处理可测定蛋白质亚基的分子量。 （3）等电聚焦电泳（isoelectric focusing electrophoresis,IFE) PAGE凝胶中加入两性电解质（ampholine)，在外加电场下可自然形成连续PH梯度，电泳时各蛋白质迁移到其等电点PH处并停留。可测定蛋白质等电点。 四、变性作用 1、概念 见P117 2、引起蛋白质变性的因素 物理因素：加热、紫外线、超声波、射线、振荡等。 化学因素：强酸、强碱、有机溶剂、重金属等。 3、变性本质与可逆变性 蛋白质空间结构破坏，一级结构并未破坏。 denaturation renaturation 4、蛋白质变性后的表现 溶解度降低 生物活性降低或丧失 粘度增加 反应基团增加 易被酶消化 5、蛋白质凝固见P119 凝固是蛋白质深度变性，不可逆转。 五、 别构作用 （一）有关概念 1、变构现象 蛋白质空间结构变化从而引起蛋白质分子性质发生改变，以适应生理功能的现象。 与蛋白质结合后引起蛋白质变构的物质称为别构效应物或别构调节剂。 被蛋白质结合并受蛋白质作用的分子称为蛋白质的底物或配基。如O2是血红蛋白的配基。 别构效应：别构效应物与蛋白质结合后引起蛋白质构象改变从而改变其生物活性的现象。 有时配基本身就是别构效应剂。如O2是血红蛋白的配基，也是别构效应物。 （二）血红蛋白氧合的别构效应 血红蛋白是由两条α链和两条β-链组成的四聚体蛋白质。 α链和β-链的三级结构和肌红蛋白非常相似，每条链各结合一个血红素辅基，故每分子血红蛋白可携带4个O2 A、两种分子构象 Hb:血红蛋白的4个亚基之间由8个盐键相连，整个分子结构紧密，不易和O2分子结合。 HbO2的别构效应：当O2分子与一个亚基的血红素卟啉铁结合后，铁原子半径缩小，牵引相邻肽段，该亚基构象改变，盐键破坏，从而使整个分子构象改变，更利于和O2分子结合。 B