微生物检测PPT.ppt

常规日检指标检测方法要点 微生物学检测基础及要点 目 录 微生物学指标检测方法要点 1、采样容器 一、微生物学检测基础及要点 （一）样品的采集 采集使用过消毒剂水样的采样容器应在清洗晾干后加入硫代硫酸钠等试剂； 采样容器的瓶盖应使用牛皮纸/锡纸等进行包裹，并用绳子固定； 采样容器应经过160 ℃的干热灭菌处理； 采样容器在采样前不可荡洗。 2、采样过程 从龙头采集样品时，应放水至少2分钟后再取样，保证样品具有代表性； 采集微生物指标样品前应对龙头进行消毒； 采样过程中应避免对瓶口及瓶塞造成污染； 采集的微生物样品应在4小时内进行检测。 一、微生物学检测基础及要点 （二）样品的检测 1、检测环境 2、相关设备 无菌室、缓冲间、操作间； 紫外线消毒30分钟，消毒后再过20分钟才能进入； 缓冲间配备有专用的衣帽鞋。 干燥箱； 培养箱； 高压灭菌器； 冰箱； 紫外灯； 微生物检测过滤器； 显微镜等。 一、微生物学检测基础及要点 （二）样品的检测 3、试剂配制 4、检测过程 按照标准检测方法自行配置； 购买成品的培养基，按照说明书进行配置； 所有试剂均应采用适当的方式进行消毒处理； 试剂配置过程中不得随意离开。 检测前应做好个人卫生的处理，尤其是应用肥皂进行手部清洗； 检测程序要严格按照作业指导书进行操作； 检测中所有接触样品的器具使用前均应进行灭菌处理。 一、微生物学检测基础及要点 （二）样品的检测 5、检测辅助记录 6、质控措施 采样容器、平皿、吸管、培养基等的消毒记录； 无菌室的环境监控记录； 废弃物的处理记录； 培养箱、冰箱、紫外灯等的监控记录。 每批样品至少做一个环境、培养基空白样品； 每批样品平行样不得少于10%，至少两个； 定期进行环境空白、试剂空白的检测； 采样菌种、微生物质控试剂进行质控检测。 常规日检指标检测方法要点 微生物学检测基础及要点 目 录 微生物学指标检测方法要点 总大肠菌群检测 二、微生物学指标检测方法要点 1、总大肠菌群概念 总大肠菌群系一群在37℃培养24h至48h能够发酵乳糖、产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 总大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。一般认为该菌群细菌可包括埃希氏菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属和柠檬酸杆菌属等。 2、总大肠菌群的来源 总大肠菌群分布较广，调查研究表明，主要来自人和温血动物粪便 ，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因；同时，总大肠菌群还可能来自植物和土壤，在营养丰富的水体中检出，即在非粪便污染的情况下，也有检出的可能性。 二、微生物学指标检测方法要点 4、总大肠菌群的限值 GB5749-2006《生活饮用水卫生标准》中规定，任意100mL水样中不得检出总大肠菌群. 3、总大肠菌群的检测意义 大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示饮用水中是有否粪便污染。 当饮用水受到粪便等污染时，一般除了会有正常菌群外，还可以推测出饮用水中存在着肠道致病菌（如沙门氏菌、志贺氏菌等）污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁。而从水中直接检验肠道致病菌不仅方法复杂，需时间长且也不一定能分离出来。所以在实际工作中，常采用机体肠道内的某些正常菌群，作为水被粪便污染的标志，进而标志饮用水中被肠道致病菌污染的可能性（存在风险）。 一般地说，总大肠菌群能够指示肠道传染病菌存在的可能性，但它不是专一的指示菌。 二、微生物学指标检测方法要点 总大肠菌群的测定，GB5749-2006《生活饮用水卫生标准》中规定有三种方法：发酵法、滤膜法、酶底物法。一般来说，发酵法适用于饮用水、水源水尤其是浊度较高的水样，滤膜法适用于饮用水及浊度低的水源水水样。 （一）多管发酵法（检验程序） 乳糖初发酵实验 复发酵实验 分离培养 结果报告 具体操作详见GB5749-2006 《生活饮用水卫生标准》。操作过程中注意以下要点： 样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。 挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。 根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。 二、微生物学指标检测方法要点 二、微生物学指标检测方法要点 2、革兰氏染色实验 由于微生物细胞含