微生物快速检测方法PPT.ppt

微生物快速检测方法简介;常见微生物检测项目;传统计数改良法 1、培养膜法 2、螺旋平板计数法：螺旋接种仪＋菌落计数 3、滤膜法：常用于一些可过滤样品的检测 快速检测的新方法 1、ATP生物荧光法 2、电阻抗法 3、颜色变化 4、流式细胞技术及激光扫描技术 5、其它：热量法，放射测量法;培养膜法_快速检测纸片技术;培养膜法_快速检测纸片技术;培养膜法_快速检测纸片技术;螺旋平板法;原理 　 样品制备的菌悬液在琼脂表面形成阿基米德螺旋型轨迹。 当用于分液的空心针从平板中心移向边缘时，菌液体积减 少，注入的体积和琼脂半径间存在指数关系。培养时菌落 沿注液线生长。用一计数的方格来校准与琼脂表面不同区域有关的样品量，计数每个区域的已知菌落数，在计算细菌浓度。 ;平皿旋转;优点 与传统方法相比，无需稀释梯度，每个梯度倒2个平板，节省了大量人力物力。 缺点 检测时间并没有缩短，菌落总数仍需要培养48小时。 需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。;滤膜法;ATP生物荧光法;10秒获得结果;ATP法检测成品的优缺点 优点：大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。 缺点：ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的清洗保养要求特别高。另外，有存在假阴性的可能。;电阻抗法测定细菌总数;　　M=(R0-RT)/R0×100% 其中R0表示开始时培养基的阻抗值 　　RT表示任意时刻培养基的阻抗值 　　M表示培养基电阻减少的百分数。 电阻越小细菌活动越多，在一定范围内，菌落形成单位的对数Log(CFU)与IDT（阻抗检测时间）呈直线关系。;优缺点： 电阻抗法较省力，样品细菌数在4～18小时内出结果。但对于菌数太低的不好，样品中还不能用防腐剂，否则结果是乱七八糟的。 电阻抗法制作标准曲线过程中工作量较大，但以后的检测简便的多，不需要一系列稀释，只需样品1ml，培养基9ml，测量管一只。;通过颜色变化检测;梅里埃的BacT/Alert微生物检测仪;流式细胞技术 ;FOSS公司BactoScan FC牛奶中总菌数快速检测仪 采用流式细胞原理。对微生物进行核酸染色，用流式细胞技术进行计数。 优点：速度快(50-150样品/小时) 缺点：死活细胞一起检测，消耗成本较高，仪器比较难保养。灵敏度不够高。 适合牛奶企业检测原奶中细菌总数。;美国Chemunex公司微生物快速检测系统 将流式细胞技术与活细胞荧光探针标记及激光扫描技术相结合，推出的最新一代的速度更快的Bactiflow以及更高端的ScanRDI和D-count微生物快速检测仪。 其最大的特点是只检测活细胞数，速度极快，处理量大。 检测步骤：1、过滤；2、标记，直接对活细胞和酵母进行标记；3、激光扫描。 ;三种型号的差异;　利用细菌生长时产生热量的原理设计而成。微生物在生长和代谢的过程中，能产生大量的代谢热。由于各种微生物的代谢产物热效应不同，因此可显示出特异性的热效应曲线图。热效应曲线图的形成，是由于培养基含有多种成分，微生物则产生多种不同的代谢产物，以此表现出的热效应为多个曲线峰，如为单一营养成分，则只有一个峰出现。 　在细菌生长的过程中，用微量量热计测量产热量等热数据，经计算机处理，绘制成以产热量对比时间组成的热曲线图，以此推断细菌存在数量。;发射测量法;致病菌快速检测方法;显色培养基法;酶联免疫技术—mini-Vidas全自动免疫分析仪;分子生物学方法;优缺点 分子生物学方法检测致病菌，特异性较强，技术较为前沿，特别是相对国标方面来???。 假阳性概率仍然较高，因此只能作为一种初筛方法。 速度方面：仍然需要增菌，一般是第二天出结果，与免疫法比没有速度优势。 目前不少产品已经通过AOAC的认证。