生物化学_第十一章_DNA的生物合成.ppt

 第十一章 DNA生物合成（DNA Biosynthesis） 大连医科大学生物化学与分子生物学教研室 崔秀云 教学要求： 遗传信息的中心法则 DNA 复制的一般规律 真核生物DNA复制所需要的酶及因子 真核生物DNA复制的过程 原核生物DNA复制的过程 DNA的逆转录过程 DNA损伤与修复 遗传信息传递的中心法则（central dogma） 在DNA进行合成时，以亲代DNA为模板合成子代DNA，即将遗传信息准确地复制到子代DNA 分子上，这一过程叫做复制（replication）。以DNA为模板合成与DNA某段核苷酸顺序相对应的RNA分子，此过程称为转录（transcription）。然后以RNA中的mRNA为模板，按照其核苷酸顺序所组成的密码（codon）指导蛋白质合成，这一过程称为翻译（translation）。遗传信息传递方向的这种规律称为中心法则（central dogma）。某些RNA病毒可通过逆转录过程进行遗传信息的传递。 第一节 DNA复制的概况一. DNA的半保留复制? 在DNA复制过程中，两条螺旋的多核苷酸链之间的氢键断裂，然后以每条链各自作为模板合成新的互补链。这样新形成的两个子代DNA分子与原来DNA分子的碱基顺序完全一样。在此过程中，每个子代分子的一条链来自亲代DNA。另一条链则是新合成的，这种复制方式称为半保留复制(semi conservative replication )。 1．DNA聚合酶（DNA polymerase）  DNA聚合酶以DNA为模板,以dNTP为原料,需要镁（或锌）离子作激动剂催化如下的反应: ? 2．引发酶（primase） 引发酶能利用DNA 为模板，以NTP为底物，合成一小片段RNA，作为DNA 聚合酶的引物。 在真核生物，引发酶与DNA聚合酶α形成一个复合物，这个复合物合成大约10个核苷酸长的RNA引物，然后DNA聚合酶α的大亚基发挥DNA 聚合酶的活性，以dNTP为底物合成大约15-30个脱氧核苷酸以延长引物。RNA-DNA 引物（大约40个核苷酸）合成后再由其他DNA聚合酶延长DNA 链。 3．拓朴异构酶（topoisomerase） 在复制过程中，DNA的超螺旋结构必须解开，拓朴异构酶能松弛超螺旋。 人类有两种拓朴异构酶，分别为I型和II型。 4．解(螺)旋酶 (helicase) 在DNA复制中以单链DNA为模板，合成子代DNA。解螺旋酶能解开双螺旋，其作用是在复制叉前解开一小段DNA。 5．单链DNA结合蛋白(single- strand DNA binding protein,SSB) 单链DNA结合蛋白对单链DNA有高亲和力，能特异地结合到分开的单链DNA上。对DNA复制区形成的单链DNA有稳定作用。 在真核生物中，一种单链DNA结合蛋白称之复制蛋白A（replication protein A,RPA）结合到暴露的单链上。 6. 复制因子C（replication factor C, RFC ） RFC是一种夹子的装载因子（clamp-loading factor）。RFC帮助这个环的装配。此因子作为DNA聚合酶α和δ之间的连系物或纽带，有助于前导链和后随链的同时合成。 7．增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen ,PCNA ） 增殖细胞核抗原是DNA聚合酶δ的辅助蛋白质，包含在引物的识别复合物中。DNA聚合酶δ催化DNA合成反应的连续性是由PCNA来承担的。PCNA的三个亚基绕着DNA形成一个滑动夹子（sliding clamp）,DNA聚合酶δ附着于滑动夹子上。PCNA是在复制的细胞中发现的第一个核抗原，为此而命名。此因子也存在于全身性红斑狼疮病人血清中。 8．核酸酶H和盖内切核酸酶 （RNaseH and flap endonuclease 1,FEN1） 它们参与去除RNA引物的作用。核酸酶H是一种内切核酸酶，降解RNA引物，留下一个核苷酸连在冈崎片段的末端,由FEN1完成去除最后一个核苷酸。 9. DNA连接酶 DNA连接酶催化两个DNA片段通过3’，5’-磷酸二酯键连接在一起，形成更大的DNA片段。这一反应需要ATP供能。DNA 连接酶不但在DNA复制中起作用，而且在DNA损伤的修复和重组DNA中不可缺少。 一、DNA复制起始过 程?1．DNA复制的起始