生物化学课件--第19章基因工程简介.pptVIP

第十九章基因工程简介 一 基因工程 基因工程是由七十年代初才开始发展起来的一门科学。其主要内容是一种生物的基因在体外结合在另一生物的基因组（DNA分子）中，再把它引入到生物的细胞内进行表达，形成具有新遗传性状的生物。而这种具有新遗传性状的生物是按人们的设想制造出来的，它将有益于人类。 二 获得目的基因的方法 为了把某种基因转移到细菌中去表达，首先必须获得纯的该种基因（称为目的基因）。目前获得目的基因的方法大致有三种。 （1）从含有目的基因的生物DNA中获得，即将此生物的DNA分离出来后，用限制性内切酶（此种酶由DNA链内部的一定部位将DNA切断）将其切成许多碎片，然后分离出含有目的基因的碎片。 （2）先分离出目的基因的转录物mRNA，再用此mRNA反转录出DNA，称为cDNA，亦即目的基因。 （3）如果已知目的基因的核苷酸顺序，可人工合成它，此法适用于分子量比较小的基因。 三 载体 得到目的基因之后，一般要通过一定的载体才能将目的基因转移到宿主细胞内。目前最常用的载体是细菌的质粒，质粒是细菌细胞中含有的一类环状DNA分子。载体必需具有的性质是： （1）能与目的基因结合在一起。 （2）新组成的DNA分子必需能在适当的寄主细胞中进行复制，目的基因要能够表达。例如，以大肠杆菌为寄主细胞，则质粒和λ噬菌体是适当的载体。 在理论方面，目前主要是用基因工程作为手段，以纯化和扩增基因，从而获得大量纯系DNA片段，作为核酸序列分析、基因组的组织分析和基因表达调控研究的材料。这三项工作的开展，将大大促进细胞分化、肿瘤发生、进化等重大生物学问题的研究。 在生产实践方面，目前主要是把一些目的基因转移到细菌中，利用此种细菌大量生产人们所需要的蛋白质，而这些蛋白质是用其他方法不能大量生产的。人类已能利用基因工程的方法，使细菌产生大量牛的生长激素，用以提高牛奶和牛肉的产量。又如用同样方法已制造出胰岛素和干扰素等用于临床治疗。 生物学家把大鼠的生长激素基因转移到小鼠的受精卵细胞内，发育成新型小鼠，其生长速度比原来快50%，体重也比对照大很多，并把这种新型的小鼠，称为超级小鼠。这个成果提示，如果我们能用类似的方法制造出具有类似性能的家畜（猪、鸡等），将具有重大的生产意义。目前人们还在研究把固氮细菌的固氮基因转移到其他细菌中以解决氮肥问题；把大豆蛋白的基因转移到小麦、玉米等中以提高这些作物的蛋白质含量；用基因工程方法制造猪的生长激素，以提高猪肉产量和增加瘦肉率等。 总之，基因工程的研究成果，将变成为巨大的生产力。它能迅速提高农业、畜牧业的产量，为人医、兽医提供优良的药物，以及解决许多生物学中的重大问题。 PCR原理 鸡输卵管上皮细胞特异性表达载体的构建 The list of eukaryotic expression vectors constructed Southern hybridization of radioactivity isotope Production of transgenic chicken by nuclear transfer Embryos Produced by Nuclear Transfer In vitro development of chicken-rabbit interclass cloned embryos Karyotype Analysis of Reconstructed Blastocyst Nuclear DNA Analysis avian feather keratin gene D P1 5‘-GGAGAAGGTCCAGGGCTGACTTTA-3‘ P2 5‘-ACTTCTCTTGGCAAACATGCAACC--3‘ P3 5‘---GCGTCCACCTCATCCTTAGCAG---3 Electrophoretic analysis of PCR product using specific avian feather keratin Mitochondrial DNA Analysis Primers for amplification rabbit mitochondrial DNA PR1: 5‘-TCTACATACACGTAGGCCGCGGAA---3 PR2: 5‘-GAGGAGAAGAATGGCTACAAGGAAA-3 Primers for amplification chicken mitochondrial DNA PC1: 5‘-CCCCAGCAAACCCAC TAGTA--3 PC2: 5‘-TGGTCTAGGGTTCCGATT