生物技术制药第八章教材.pptVIP

次级产物合成的基本特征 1、微生物的次级代谢是微生物生理、生化状态的体现，生长后期开始形成，当培养液中缺乏某种重要的营养物质而使细胞生长繁殖受到限制时，合成才启动； 2、以初级产物为前体，受初级调节，初级受阻，次级也不能合成； 3、一种底物可合成多种结构上完全不同的次级产物，不同微生物可合成相同的产物； 4、合成次级产物的酶系对底物的特异性不强，进行次级代谢的产生菌往往同时合成多种结构相似的次级产物； 5、次级合成过程中，有时控制次级产物合成的基因不仅位于染色体上，也可位于质粒上，质粒易缺失，次级产物合成不稳定。 （三）、微生物药物生物合成的基本途径 1、次级产物的生源 次级产物中的构建单位称之为生源（biogen），一般直接或间接来源于代谢中间物或初级代谢物，可直接作为合成的前体，也可修饰之后用于合成次级产物，虽然次级代谢产物种类繁多，但生源只有几种。 第八章 微生物制药 本章主要内容 第一节 微生物药物的产生菌 第二节 微生物药物产生菌的获得 第三节 微生物药物的生物合成 新微生物药物的筛选过程 药物的产生菌 细菌； 放线菌（目前发现的10000种左右的活性物质中有2／3是由放线菌产生的）; 丝状真菌。 细菌，临床应用的由细菌产生的有价值的抗生素并不多，多为多肽类药物。杆菌肽、粘菌素、多粘菌素。 青霉素、头孢菌素、灰黄霉素。 青霉素，β－内酰胺类抗生素，抑制细胞壁的合成，作用于转肽酶和羧肽酶。 灰黄霉素抑制真菌的生长，使细胞停止分裂。 放线菌产生的药物主要是抗菌药，其次是抗肿瘤药 （1）氨基糖苷类抗生素，临床应用较多广谱抗细菌，作用机制是抑制细菌蛋白质的合成。链霉素、卡那霉素、庆大霉素。 （2）四环类抗生素，广谱抗细菌，抑制蛋白质的合成，与30s小亚基结合，抑制氨酰tRNA与核糖体A的结合，阻断肽链延长。四环素、金霉素、土霉素。 （3）大环内酯类抗生素，抗革兰氏阳性细菌，支原体和衣原体。与50s大亚基结合，抑制转肽反应，阻断蛋白质的合成。红霉素、螺旋霉素。 （4）紫霉素类抗生素，抗革兰氏阳性和阴性细菌，结核杆菌，与30s和50s亚基结合，抑制蛋白质合成的起始反应和肽链延长中肽基tRNA的转移。如紫霉素、结核放线菌素。 （5）糖肽类抗生素，抗革兰氏阳性细菌和金黄色葡萄球菌，抑制细胞壁粘肽的合成。如万古霉素。 二、微生物的来源 土壤，海洋，河，湖，极端环境和枯树叶，堆肥。 三、土壤微生物的分离 （一）、采集样品 不同来源的土壤中，微生物的种类和数量有很大的差异，含有机氮较多的中性土中，放线菌和细菌较多。 含有机氮较少的酸性土中，真菌较多。 0－40厘米深处土壤中微生物的垂直分布： 真菌，地表0－0.3米；放线菌和细菌，0－1米，80％在0－10厘米。 采样，5厘米以下，未开垦土地为佳，不同地理和生态环境，不同植被或不同质土壤对放线菌的种类，数量影响较大，南方放线菌种类比北方多，适宜季节为春秋季。 （二）、分离 1、样品的处理 温度：40－100度，高温处理，得到不同种类放线菌。 化学试剂：SDS－酵母浸膏，减少细菌55－90％，将风干土壤与碳酸钙26度培养7－9天，再分离，放线菌数量增加100倍。 物理：离心，16000转，离心20分，上清液主要是放线菌的孢子，沉淀为细菌、真菌孢子。 2、分离培养基 高氏一号，查氏培养基，特殊培养基。 3、抑制剂的应用 目的菌是放线菌，培养基中加入抗真菌的试剂，抗细菌的青霉素或链霉素。 4、分离方法 稀释分离法、划线分离法、组织分离法、干土喷射法——喷土机 5、培养条件 酸度，温度，25－30度，7－14天。 6、挑选 单菌落传斜面。 （三）、新微生物药物的筛选 初筛： 合适培养基及条件利于产生次级代谢产物。 培养方式：固体，琼脂块转到活性测定平皿中；液体，发酵液，测抗菌活性。 筛选模型的要求：高专一性，高选择性，高敏感性，快速反应性，高稳定性。 1、常利用敏感菌作检定菌的琼脂扩散法； 2、抗生素耐药突变株。 找到有某种活性的出发菌株。 复筛： 作平行样，多次实验，确证其所产活性物质的能力和稳定性。 （四）、生产菌的改良 1、自然选育：对于退化、产量下降，菌种不纯等现象，常进行自然选育进行纯化。 2、诱变选育：诱变剂有物理和化学两类，物理诱变剂常为紫外线、X射线，激光等；化学诱变剂主要是烷化剂、碱基类似物等。 3、杂交育种：优良性状的集中体现，原生质体融合——遗传物质的交换重组，再生后得到正常菌株。 4、基因工程改良菌种：目的基因，载体，重组体，产量增加。 第三节 微生物药物的生物合成 （一）、微生物的代谢 微生物代谢是指微生物体内的化学反应（包括合成和分解代谢）。 根据微生物在体内代谢过程中产生的代谢产物在机体的不同作用，可分为初级和次级