实验六质粒dna的制备稿件教材讲义.pptVIP

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2018-02-23 发布于天津
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实验六质粒dna的制备稿件教材讲义.ppt

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实验六碱变性法小量制备质粒DNA;一．实验目的;Relaxed circle;质粒类型;质粒的应用;;;分离质粒DNA方法;差速离心（differential centrifugation）是利用不同离心速度产生的不同离心力，将沉降系数不同的各种亚细胞组分和各种颗粒分开。用于分离大小、形状显著不同的组分，根据颗粒沉降速度不同得以分离. 特点：（1）介质密度均一；（2）速度由低向高，逐级离心。沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高尔基体——核蛋白体。可将大小相差悬殊的细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯度离心再行分离纯化。 ;当以pH4.8的NaAc/KAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质－SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。而质粒DNA仍为可溶状态留在上清中。;四、操作步骤;;思考题;OC L CCC;