食品微生物检测技术方案研究.pptVIP

三、磺胺二甲嘧啶的间接竞争ELISA检测 （一）人工完全抗原的合成 （二）合成抗原的鉴定 （三）抗体的制备与纯化 （四）标准竞争抑制曲线的制作 （五）畜产品中SM2残留的ELISA检测 （六）方法评价 1 特异性 2 灵敏度 3 准确度 4 精确度 第五章 食品微生物检测技术 讲授提纲 一、相关食品国家标准 二、食品微生物常规检验内容与步骤 三、菌落总数检验 四、大肠菌群检验 五、病原菌检验 一、相关食品质量标准 三、菌落总数检验 检样稀释及培养 （1）以无菌操作，将检样25g（或25mL）剪碎以后，放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000r/min-100000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。 （2）用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。 （3）另取1mL的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。 （4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 （5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46 ℃ 营养琼脂培养基[可放置在（（46±1）℃）水浴锅内保温]注入平皿15mL-20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。 （6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（36±1）℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1g（1mL）样品所含菌落总数。 样品稀释程序 菌落计算方法 （1）菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 （2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。 其他检验方法 1.涂布平板法 2.点滴平板法 与涂布平板法相似。不同的是点滴平板法只是用标定好的微量吸管或注射器针头按滴(使每滴相当于0．025m1)将检样稀释液滴加于琼脂平板上固定的区域(预先在乎板背面用标记笔划成四个区域)。 四、大肠菌群检验 1.大肠菌群概念 大肠菌群系指一群在37度能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽胞杆菌。 从种类上讲，大肠菌举包括许多生化及血清学特性均很不相同的细菌，其中有埃希氏菌属，枸椽酸菌属、肠杆菌属和克雷伯氏菌属等等．以埃希氏菌属为主，大肠菌群MPN是指在100ml(或100g)食品检样中听含的大肠菌群的最近似或最可能数。 2.大肠菌群指示作用 作为（判断食品是否被肠道致病菌所污染及污染程度的）指示菌的条件： ①和肠道致病菌的来源相同，并且在相同的来源中普遍存在和数量甚多，以易于检出。 ②在外界环境中的生存时间与肠道致病菌相当或稍长。 ③检验方法比较简便。 大肠菌群在数量和检验方面均符合指示菌的三项要求， 3.大肠菌群数量的表示方法 1）大肠菌群MPN 大肠菌群MPN是采用一定的方法，应用统计学的原理所测定和计算出的一种最近似数值； 2）大肠菌群值。 大肠菌群值是指在食品中检出一个大肠菌群细菌时所需要的最少样品量。 故大肠菌群值越大，表示食品中所含的大肠菌群细菌的数量越少，食品的卫生质量也就越好：在这两种表示方法中，目前国内外普遍采用大肠菌群MPN，而大肠菌群值逐渐趋于不用。 4.大肠菌群检验方法 （1）检样稀释 1）以无菌操作将检样25mL(或25g)放于含有225mL灭菌生理盐水或其它稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预