魏氏梭菌及其主要毒素的研究进展文件材料.pptVIP

β2毒素 1997年Gibert等首先从来自仔猪坏死性肠炎病例的培养上清中分离纯化到这种C型产气荚膜梭菌(CWC245)毒素 β2毒素与家畜的梭菌性胃肠道疾病有关 β2毒素在猪的胃肠道疾病中发挥了一定作用 β2毒素基因存在于质粒上 研究刚起步 Logo 魏氏梭菌及其主要毒素的研究进展 报告内容 魏氏梭菌概述 魏氏梭菌毒素研究 综述 分型及其依据 魏氏梭菌产生的毒素 四种主要毒素研究进展 纯化及鉴定 细菌毒力 分型及其依据 根据此菌产生外毒素的种类，可将其分为A、B、C、D和E 5个型 A型菌：α B型菌：αβε C型菌：αβ D型菌：αε E型：αι 魏氏梭菌与相应疾病 其中，A型菌主要引起人的气性坏疽和食物中毒，也可引起动物的气性坏疽，牛、绵羊、家兔肠毒血症 B型菌主要引起羔羊痢疾； C型菌主要是牛、猪肠毒血症、羊猝狙 D型菌引起羔羊、绵羊、山羊、牛以及灰鼠的肠毒血症； E型菌可致犊牛、羔羊肠毒血症，但很少发生。 气性坏疽发病急剧，后果严重，需要尽早准确的做出微生 物学诊断，争取早期治疗： 标本 镜检：可发现G＋大杆菌，并伴有其他杂菌和少量形态 不规则的白细胞。 培养基 厌氧培养 进一步鉴定: 牛乳培养基 生化反应：TSC 动物实验：泡沫肝实验  分离诊断 纯化 液体培养基 65-70°C半小时 43°温箱培养 3-4小时 连续传代 镜检 TSC.石蕊牛奶 血平板 侵袭力：病原菌有突破宿主皮肤、黏膜  生理屏障等 免疫防御机制，进 入体内定居、繁殖和扩散的能 力，包括荚膜、粘附素和侵袭 性物质。 毒素：含有损害宿主组织、器官并引起生理功能紊乱的大分子成分。 毒力 细菌的毒力 荚膜、微荚膜。 　　　黏附素：细菌表面的蛋白质。　　　　　　 菌毛分泌物　　　　　　 细菌的表面组分：如磷壁酸。 2、侵袭性物质：协助病菌抗吞噬或向四周扩散。如致病性葡萄球菌凝固酶、A群链球菌透明质酸酶、链激酶等从而有利于细菌在组织中扩散。 ㈠侵袭力 1、菌体的表面结构 　　　　细菌在生长繁殖中产生和释放的毒性成分，可直接或间接损伤宿主细胞、组织和器官，干扰其生理功能。 外毒素 内毒素 （二）毒素 疫苗现状 国内首先出现的是羔羊痢疾，肠毒血症等单价苗，继之出现了羊猝狙、快疫二联苗，羊黑疫、快疫二联苗，快疫、羔羊痢疾、肠毒血症三联苗。文希喆等(1978)研制成功了快疫、羔羊痢疾、碎狙、肠毒血症、黑疫五联苗。纪金春等(1978)研制成功了快疫、羔羊痢疾、猝狙、肠毒血症、黑疫和肉毒中毒六联苗。 疫苗现状 上世纪70年代到80年代，中监所的文希喆、王泰健、屠伟英等科研人员，在国际上率先开创了梭菌多联干粉苗的研究，取得满意效果，保存期长，使用方便，可以随意搭配，疫苗的保护期也得到的延长，基本克服了液体苗的缺陷。 效力检验：多联苗所含的成份越多，需要的动物也越多，以致于达到不便检验的程度，严重阻碍了多联苗的发展， 采用免疫动物测定血清中和效价的方法，来评价梭菌苗的效力。其方法是用梭菌苗免疫动物两次后，用国际单位(I.U.)衡量血清的中和效价，检验每批疫苗所需试验动物为8-12只。 免疫效果与制苗菌液中毒素毒力正相关 抗原含量过大会产生严重局部反应，会导致安全性检验不合格 主要毒素 α毒素 各型产气荚膜梭菌均产生α毒素,它是产气荚膜梭菌最重要的毒素之一,同时又是A型产气荚膜梭菌的主要毒素 是A型产气荚膜梭菌的主要毒素。它具有磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)和鞘磷脂酶(Sphin-gomyelinase)两种酶活性,能水解细胞膜的主要成分膜磷脂,从而破坏细胞膜结构的完整性 理化性质和生物学特性 α毒素是由370个氨基酸组成的单链多肽,分子量为43 ku。它是一种依赖于锌离子的多功能性金属酶,具有细胞毒性、溶血活性、致死性、皮肤坏死性、血小板聚集和增加血管渗透性等特性 当把α毒素加热至60~70℃时,就可以使其失去活性,当进一步加热到100℃时,又可以恢复部分活性 α毒素基因的克隆与表达 α毒素基因在禽类和哺乳动物中都是保守的 毒素的启动子是最强的启动子之一,可被大肠杆菌的RNA聚合酶所识别,因而α毒素在自身启动子下不仅可在产气荚膜梭菌本身中高效表达,也可在大肠杆菌中得到高效表达 免疫α毒素的C端功能区,来预防产气荚膜梭菌所致气性坏疽的发生 刘家森等克隆了α毒素基因序列中从第