第36章 RNA的生物合成.ppt

第36章 RNA的生物合成 3.2 真核生物的DNA转录（起始、延伸和终止） 4.1.2.2 加尾 3.1.2 转录的起始分为几个节段 ： ①RNA聚合酶全酶与模板DNA接触，生成非专一的复合物在模板上移动。 ②全酶识别启动子，并与之结合，产生封闭的“酶－启动子二元复合物”（closed binary complex）。 ③全酶与启动子-10盒紧密结合，模板DNA局部解链，形成开放式复合物（open complex）。 ④全酶与转录起始点结合，头两个核苷酸之间形成磷酸二酯键，形成酶－启动子－RNA三元复合物。 ⑤转录起始成功，RNA聚合酶释放σ因子，核心酶－DNA－新生的RNA形成转录延伸三元复合物。 周二上午从此上 3.2 真核生物的DNA转录（起始、延伸和终止） 真核生物的转录在很多方面与原核生物不同。 ①转录单位一般为单基因（单顺反子），而原核生物的转录单位多为多基因（多顺反子）； ②真核基因的三类基因分别由三类RNA聚合酶转录，它们的启动子有不同的特点； ③在转录的起始阶段，识别和结合启动子的是各种特异的转录因子（transcription factors, TFs），而不是RNA聚合酶； ④组织或时间特异表达的基因转录常与增强子（enhancer）有关； ⑤转录调节方式以正调节为主，调节蛋白的种类类型是转录因子，或调节转录因子活性的蛋白因子； ⑥与原核生物相比，转录终止调控在真核生物中不甚重要。 3.2.1 真核生物启动子的结构与功能 真核生物有三种RNA聚合酶，有三种不同的启动子 3.2.1.1 II类启动子 3.2.1.2 I类启动子 3.2.1.3 III类启动子 3.2.1.1 II类启动子 能够被RNA聚合酶II识别并结合的启动子称为II类启动子。 II类启动子含有四个元件 。 ★ TATA盒 特点：位于转录起始部位上游约25bp处，它的保守序列为TATAAAA（非模板链），但第5位和第7位上的A常被T置换。 TATA盒与原核生物的－10元件相似，但也有不同之处： ①位置不同：真核生物的TATA盒位于转录起始部位上游-25bp处，原核生物位于-10bp处。酵母的TATA盒位置变化更大，处于-30至-120之间； ②原核生物的TATA盒是转录不可缺少的，但有的真核生物GC代替了TA，或者完全缺乏TATA盒，也可进行转录。 TATA盒完全缺乏主要存在于二组基因中 ① 看家基因（housekeeping gene），包括腺嘌呤脱氨酶基因、胸苷酸合成酶基因和去氢叶酸还原酶基因等，它们都是合成核苷的关键酶。这些基因中替代TATA盒的主要是GC盒。 ② 发育调节基因，如控制果蝇发育的同源异型基因；哺乳动物中与免疫系统发育有关的基因，如鼠的脱氨核苷转移酶（terminal deoxynucleotidyltransferase, TdT）基因。 ● TATA盒的功能： ① 选择正确的转录起始位点； ② 影响转录效率； ③ 与TATA盒结合蛋白（TATA box binding protein, TBP）形成复合物，再与其它因子结合。对于无TATA盒的基因，TBP则与其它启动子元件结合。 ★ 上游元件：包括GC盒和CCAAT盒 ● GC盒的特点： ①保守序列是CCGCCC，常以多拷贝形式存在于－90处。 ②对GC盒保守序列进行突变，可使启动子活性下降。 ③GC盒的功能与序列的方向性无关，即使旋转180°，它仍具有功能，但GC盒无位置独立性，如果将GC盒向TATA盒反方向移动数十个bp，GC盒则丧失刺激转录的功能。 ④在脊椎动物DNA中，GC盒呈特征性非随机分布，常被称之为CpG岛（CpG island）或CG岛，因为这些比较少见的CG二核苷酸序列就像在DNA序列汪洋大海中浮现的座座孤岛。 利用HpaII 等对CG敏感的限制性内切酶可以检测CpG岛的存在。如果在克隆的DNA片段中发现CpG岛，提示这个片段中可能含有转录起始区。 ● CCAAT盒的特点： ①保守序列是CCAATCT，一般位于上游－75bp左右； ②其作用也是控制转录效率，其特点也是它的功能与方向无关。 ③CCAAT盒必须与CCAAT结合转录因子（CCAAT-binding transcription factor, CTF）和CCAAT/增强结合蛋白（CCAAT/enhancer binding protein, C/EBP）结合后才能发挥作用。 ★ 起始子和下游元件 一些II类启动子在转录起始部位周围有一段保守序列，称为起始子，序列为PyPy ANT/ApyPy。其中Py代表胞咪啶C或胸腺咪啶T，N代表任意碱基，A代表转录起始位点。 起始子即可单独对转录始于固定位点起作用，亦可与TATA盒一起组成核心启动子。 不同