凝胶色谱净化-高效液相色谱法测定食用油中的胆固醇.PDFVIP

凝胶色谱净化-高效液相色谱法测定食用油中的胆固醇 北京莱伯泰科仪器有限公司 前言： 胆固醇是动物性食物中常见的成分，而人类过多食用胆固醇则会引发动脉粥样硬化、高 血压、冠心病等一系列心血管疾病以及风湿性关节炎、癌症、糖尿病和帕金森等相关疾病。 据文献报道，食用植物油中一般不含或含有极少量的胆固醇，而通常动植物组织中都含有甾 醇，动物油脂的特征性甾醇是胆固醇。因此，可以通过检测食用植物油中的胆固醇含量来判 定植物油中是否含有动物油脂，从而推断该植物油是否混有地沟油。 目前，有关食品中胆固醇的测定方法主要有高效液相色谱法（HPLC ）、气相色谱法 （GC ）、薄层色谱法、分光光度法等。这些方法足以解决胆固醇的分离和检测，但样品基 体复杂和目标物含量低使得样品前处理成为决定分析结果好坏的关键环节。目前常用的胆固 醇样品提取净化方法主要是皂化法。而采用凝胶渗透色谱（GPC ）进行样品前处理的报道 还很鲜见。采用合适孔径的惰性多孔材料做固定相，GPC 就可以基于分子的空间排阻效应 大小将不同体积的物质分离。食用油中的油脂等高分子化合物在GPC 柱上保留很弱，较快 流出色谱柱，而小分子有机物则被保留在柱上，从而达到除去样品中大分子基体物质的目的。 凝胶渗透色谱技术以其突出的优点，越来越广泛地应用于含生物大分子的各类样品的前处 理。本研究采用全自动凝胶色谱仪，以胆固醇为检测目标，对样品进行分离净化，采用 HPLC 进行测定，建立了一个简便、快捷、实用的测定食用油中胆固醇的分析方法。 1、实验部分： 1.1 仪器与试剂 Auto Clean 全自动凝胶渗透色谱净化系统（莱伯泰科有限公司，美国波士顿），LC600 二元高压梯度 高效液相色谱系统（北京莱伯泰科有限公司，北京），EV331 旋转蒸发仪（北京莱伯泰科有限公司，北京）。 胆固醇 （99.7%，中国计量科学研究院），甲醇 （HPLC，北京化工厂），乙酸乙酯、环己烷和石油醚 （分析纯，北京化工厂）。实验用水均为超纯水。 1.2 标样和样品处理 1.2.1 标准溶液配制 精密称取胆固醇标样0.500 g 置于50 mL 容量瓶中，用乙醇溶解并定容，配成10.0 mg/mL 的胆固醇 储备液。更低浓度的混合标准溶液用乙醇溶液逐级稀释。所有标准溶液均置于冰箱中4 ℃保存备用。 1.2.2 样品提取方法 分别取0.5g 食用油于2 个样品瓶中，一个用等体积混合的环己烷和乙酸乙酯混合溶剂定容至5ml 作为 样品空白试剂，另一个加入3 mL 标准溶液后再用等体积混合的环己烷和乙酸乙酯混合溶剂溶解样品，用 于后续的凝胶净化。 1.2.3 凝胶渗透净化 凝胶渗透色谱柱：300 mm×20mm i.d. (Bio Beads S-X3, 200～400 mesh) ；流动相：等体积的乙酸乙 酯和环己烷混合溶液，流量：5 mL/min；紫外检测波长254nm ；收集8～16min馏分于60mL试剂瓶中，然 后在40℃，150 rpm条件下旋转蒸发至干，加入5 mL乙醇溶解，供HPLC检测。 1.3 HPLC 分析条件 色谱柱：Labtech C18 (250mm × 4.6mm)；流动相为100%的乙醇；流速1.0 mL/min；进样量20 µL ； 紫外检测波长208 nm。 2、结果与讨论 2.1 凝胶渗透色谱净化条件的优化 考察大豆油和玉米胚芽油的净化条件，图1 是在254nm 采集的大豆油、玉米胚芽油和胆固醇标准品的 色谱图，由图可知，收集8.5～16.5min 内的馏分即可得到胆固醇。 1. 大豆油，2. 玉米胚芽油，3. 胆固醇标准品 图1. 大豆油(1)、玉米胚芽油(2)与胆固醇标准品(3)的凝胶色谱净化谱图 2.2 液相色谱条件的优化 以甲醇溶液为流动相，在选定的 HPLC 条件下，胆固醇标准溶液的分离效果如图2 所示。由图2 可 见，胆固醇在18 分钟内完全分离。 mAU