[农学]植物胚胎培养.pptVIP

幼胚培养时，其发育过程有以下几种发育方式： a、胚性发育，此种方式不能萌发成苗 b、早熟萌发，长成的苗十分瘦弱 c、产生愈伤组织，再由愈伤组织分化形成胚或不定芽 (2)、早熟萌发(early mature sprouting) 幼胚接种后，离体胚不继续胚性生长，而是在培养基上迅速萌发成幼苗，通常称之为早熟萌发。在大多数情况下，一个幼胚萌发成一个植株，但有时会由于细胞分裂产生大量的胚性细胞，以后形成许多胚状体，从而可以形成许多植株，这种现象就是所谓的丛生胚现象。 (3)、愈伤组织(callus) 在许多情况下，幼胚在离体培养中首先发生细胞增殖，形成愈伤组织。一般来讲由胚形成的愈伤组织大多为胚性愈伤组织，这种胚性愈伤组织很容易分化形成植株。 离体受精技术的突破的技术前提： a、雌配子和雄配子分离技术 b、单对原生质体融合技术 c、微培养技术（将商品生产的微室置入饲养细胞的小培养皿中，培养物接微室内，通过室底部微孔滤膜吸取周围饲养细胞释放的活性物质，促进其发育） 4、离体受精的细胞学研究现状 （2） 膜融合——多精入卵问题的探讨 膜融合的方式，在不同的离体受精系统中融合的原理是 不同的，一种是精细胞质很快进入卵细胞，精细胞膜作 为其中的一部分参与了受精卵细胞膜的重组。另一种是 精细胞整体进入卵细胞，精细胞膜并不参与融合产物细 胞膜的形成。 （3） 胞质融合——精细胞质全部进入卵细胞 体内自然受精过程中，至少部分被子植物的精细胞质未能进入卵细胞；而在离体受精时，精细胞质则全部进入卵细胞 。 （4）核融合——融合过程中的信号问题 核融合一般在精—卵融合后35-90min出现 。烟草卵细胞有明显的极性即液泡端和胞质端，但无论精子在卵细胞哪一端融合，卵细胞质都可很快地移向精核处将其纳入并包被。 3、沼生目型胚乳 ◆核型胚乳与细胞型胚乳的中间类型 ◆初生胚乳核的第一次分裂将胚囊分隔为两室，其中珠孔端室比合点端室宽大 ◆核进行分裂形成状态的游离核，最后形成细胞 （二）胚乳培养的关键 A、胚乳发育时期的影响 发育早期胚乳：操作不便，诱导率低 游离核期或刚转入细胞期的核型胚乳：难得callus 旺盛生长期胚乳：易诱导产生callus ★ 旺盛期胚乳特征 §胚已分化完成 §胚乳已形成细胞组织 §充分生长，达到成熟大小 §外观为半透明的固体状 §富有弹性 水稻：授粉后4 d 黑麦草：授粉后8 ~ 10 d 黄瓜：授粉后7 ~ 16 d 梨：授粉后20 d 大麦：授粉后10 ~ 20 d 玉米和小麦：授粉后8 ~ 12 d 一些草本植物胚乳培养的适宜取材时期 一般情况下：接近成熟或完全成熟的胚乳callus诱导率很低，甚至无callus 木本植物，如：桑寄生科、檀香科植物，其成熟胚乳和诱导产生callus B、培养基和激素的影响 培养基：MS、B5、MT、White、LS等 水解酪蛋白、酵母提取物也很必要 激素：要求特殊 大麦胚乳只有在添加2，4-D的培养基上才能生长 猕猴桃胚乳培养中，玉米素最好 枣的胚乳培养中，激素似乎无特殊要求 C、其他因素的影响 蔗糖浓度：3% ~ 5% 温度：25℃ pH值：如 玉米 6.1 ~ 7.0 ； 苹果 6.0 ~ 6.2等 （三） 培养方法： A、取授粉4-8d后的幼果，常规消毒 B、无菌条件下切开果实，取出种子，分离出胚乳 C、接种在培养基上，在25-27℃和黑暗条件或散射光下培养形成愈伤组织 D、转到分化培养基上，待愈伤组织长出芽后，切下不定芽 E、插入生根培养基中，光下培养10-15d，切口处长出白色的不定根 ※两种植物胚乳培养的方法 A、枸杞 开花20d的枸杞胚乳 MS + 2，4-D 0.2mg/L 生根 MS 分化出苗 MS + BA 0.2mg/L 不同倍性的胚乳植株 callus B、葡萄 取出种子 切去合点部分