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光谱法在中药鉴定中的应用 主讲：王红娟 绪论 光谱法基础知识 一、光 光是电磁波或叫电磁辐射，具有微粒性和波动性的双重特性。即波粒二象性 波动性：波的传播以及反射、衍射、干涉、折射和散射等现象表现了电磁波的波动性，可以用频率、波长、速度等参数来描述。粒子性：光的粒子性表现为光的能量不是均匀连续分布在它传播的空间，而是集中在光子的微粒上。光子的能量E=hv。 二、光谱 光谱即按光波波长顺序排列的光带。按波长从长到短的顺序排列，光谱（即电磁波谱）包括无线电波、微波、红外光、可见光、紫外光、X射线、γ辐射和宇宙辐射。 三、紫外光区、可见光区和红外光区 紫外光区：波长10nm～400nm。 可见光区：波长400nm～800nm。 红外光区：波长0.8μm （800nm）～500μm。 四、吸收光谱 紫外光、可见光及红外光照射某些物质后，引起物质内部分子、电子或原子核间的运动状态的变化，被吸收掉一部分能量，然后透射出来，可得到一组不连续的光谱，此光谱称为吸收光谱。 五、光谱法 定义 光谱法是基于物质与辐射能作用时，测量由物质内部发生量子化的能级之间的跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法。 分类 原子光谱法是由原子外层或内层电子能级的变化产生的，它的表现形式为线光谱。 原子发射光谱法（AES）原子吸收光谱法（AAS）原子荧光分析法（AFS）X射线荧光法（XFS） 分子光谱法是由分子中电子能级、振动能级和转动能级的变化产生的，分子光谱常以谱带为其特征。紫外-可见分光光度法（UV）红外分光光度法（IR）分子荧光光谱法（MFS） 分子磷光光谱法（MPS） 六、光谱法仪器的组成 五个基本单元：辐射源、色散元件、样品容器、检测器和读出装置。 第一节  紫外－可见分光光度法及其 在中药鉴定中的应用 一、紫外光与可见光的波长范围 （10nm）远紫外区（200nm）近紫外区（400nm）可见光区（800nm） 二、紫外－可见吸收光谱（UV） 用紫外光及可见光照射某些物质后，引起物质内部电子或原子核间的运动状态的变化，被吸收掉一部分能量，然后透射出来，可得到一组不连续的光谱，此光谱称为紫外－可见吸收光谱。紫外吸收光谱，是指200nm～400nm波长范围内的近紫外区的吸收光谱。可见吸收光谱是指波长范围在400nm～800nm的可见光区的吸收光谱。紫外-可见分光光度法（UV），它是研究分子在200~800nm波长范围内的吸收光谱。 三、紫外－可见吸收光谱产生的原理 紫外－可见吸收光谱主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁，属于电子光谱。凡是含有单个或两个以上共轭双键结构的化合物分子，都能在紫外－可见光区产生特征吸收。 四、紫外－可见吸收光谱的表示方法 图1 紫外－可见吸收光谱示意图 1?. 吸收峰 2.吸收谷 3.肩峰 4.末端吸收 横坐标为波长（λ） λmax为最大吸收波长 λmin为最小吸收波长 纵坐标为吸收度（A） 五、紫外－可见分光光度计简介 紫外－可见分光光度计是在紫外-可见光区可任意选择不同波长的光测定吸光度的仪器。商品仪器的类型很多，性能差别悬殊，但其基本原理相似。一般由五个主要部件构成，即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示系统。 紫外－可见分光光度计的构造 光源：紫外光区多用氘灯，发射波长范围在150nm～450nm；可见光区使用钨灯，最适宜使用波长范围在360nm～1000nm。 单色器：是将来自光源的连续光谱按波长顺序色散，并从中分离出一定宽度的谱带。 吸收池：紫外光区必须使用石英吸收池；可见光区可使用玻璃吸收池。 检测器：最普遍采用的检测器是光电管或光电倍增管，利用光电效应使光线照射在检测器上产生光电流，进行检测。 信号显示系统：记录数据 分类 单光束分光光度计 优点：具有较高的信噪比，光学、机械及电子线路结构都比较简单，价格比较便宜，适合于在给定波长处测量吸光度或透光率，但不能作全波段的光谱扫描。 双光束分光光度计 将单色器色散后的单色光分成二束，一束通过参比池，一束通过样品池，一次测量即可得到样品溶液的吸光度。 双波长分光光度计 六、紫外－可见分光光度法在中药鉴定中的应用 目前，紫外－可见分光光度法已成为中药鉴定的分析方法之一。既可以单独应用，又可以作为色谱仪器的检测手段。既可作定性分析，又可作定量分析。常用于下列几个方面： 1、中药化学成分的定性分析 紫外－可见分光光度法已成为中药化学成分结构研究的手段之一。根据化合物的紫外－可见吸收光谱中吸收峰的位置及其相对强度，可以推测其结构中含有哪些发色团和助色团以及共轭结构情况。 2、中药化学成分的定量分析 对于已经提纯的并且在紫外和可见光区有吸收的中