大肠埃希氏菌－胸膜肺炎放线杆菌穿梭载体构建-中国兽药杂志.PDF

中国兽药杂志２０１７年８月第５１卷第８期　 　 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｒｕｇ ·１· － ｄｏｉ：１０．１１７５１／ ＩＳＳＮ．１００２ １２８０．２０１７．８．０１ － 大肠埃希氏菌 胸膜肺炎放线杆菌穿梭载体构建 李 建，张 磊，张 媛，彭国瑞，王秀丽，刘 博，辛凌翔，罗玉峰，蒋玉文∗ （中国兽医药品监察所，北京 １０００８１） － － － － － ［收稿日期］２０１７ ０１ １８　 ［文献标识码］Ａ　 ［文章编号］１００２ １２８０ （２０１７）０８ ０００１ ０５　 ［中图分类号］Ｓ８５２．６１ ［摘　 要］　 合成胸膜肺炎放线杆菌质粒ｐＫＭＡ２４２５上长度为１２６ ｂｐ及２２１４ ｂｐ 的２个ＤＮＡ 片段， 克隆到大肠埃希氏菌质粒ｐＧＳＩ 中，获得重组质粒ｐＧＳＩＡ。 ＰＣＲ扩增ｐＴＫＲＥＤ上的大观霉素抗性基 － － 因及线性化的ｐＧＳＩＡ（１２６ ｂｐ ＤＮＡ 片段 ｐＧＳＩ ２２１４ ｂｐ ＤＮＡ 片段），连接，电转化胸膜肺炎放线杆 菌，在大观霉素的选择压力下筛选鉴定到连接正确的质粒，命名为ｐＧＳＩＡＳ。 ｐＧＳＩＡＳ 测序结果符合 预期。 在大观霉素的选择压力下，含有ｐＧＳＩＡＳ 的胸膜肺炎放线杆菌血清１～１０ 型菌株均生长良好； 在氨苄青霉素的选择压力下，含有ｐＧＳＩＡＳ 的大肠埃希氏菌生长良好。 结果表明本研究构建的大肠 － 埃希氏菌 胸膜肺炎放线杆菌穿梭载体ｐＧＳＩＡＳ 序列正确，在胸膜肺炎放线杆菌及大肠埃希氏菌中 均能复制并表达质粒上的相关基因。 ［关键词］　 大肠埃希氏菌；胸膜肺炎放线杆菌；穿梭载体 － Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｓｈｕｔｔｌｅ Ｖｅｃｔｏｒ － － － ＬＩ Ｊｉａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｌｅｉ，ＺＨＡＮＧ Ｙｕａｎ，ＰＥＮＧ Ｇｕｏ ｒｕｉ，ＷＡＮＧ Ｘｉｕ ｌｉ，ＬＩＵ Ｂｏ，ＸＩＮ Ｌｉｎｇ ｘｉａｎｇ， ∗ － － ＬＵＯ Ｙｕ ｆｅｎｇ，ＪＩＡＮＧ Ｙｕ ｗｅｎ （Ｃｈｉｎａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８１，Ｃｈｉｎａ） － － 　 　 Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｊｉａｎｇ Ｙｕ ｗｅｎ，Ｅ ｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｙｕｗｅｎ＠ｉｖｄｃ．ｏｒｇ．ｃｎ － － Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａ １２６ｂｐ ｌｅｎｇｔｈ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔ ａｎｄ ａ ２２１４ｂｐ ｌｅｎｇｔｈ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｆｒｏｍ Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｐｌａｓｍｉｄ ｐＫＭＡ２４２５ ｗｅｒｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｃｌｏｎｅｄ ｉｎｔｏ ｐＧＳＩ． Ｔｈｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄ ｗａｓ ｎａｍｅｄ ｐＧＳＩＡ． Ｓｐｅｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ