异戊二烯合成酶IspS在大肠杆菌中的表达及其产异戊二-QIBEBT-IR.PDF

9 3 Vo.l 9 No. 3 2011 5 Ch inese Journal of B ioprocess Engineering M ay 2011 do:i 10. 39 9/ .j issn. 1 72- 3 78. 2011. 03. 002 (IspS) 1, 2 1 2 2 1 2 苏思正 , 刘建忠, 杨建明, 刘 炜, 王 乾, 咸 漠 ( 1. 武汉科技大学 化学工程与技术学院, 武汉 430081; 2. 中国科学院 青岛生物 源与过程研究所, 青岛 2 101) : 将来源于银白杨的异戊二烯合成酶基因按照大肠杆菌密码子偏爱性进行 化, 克隆到表达载体 pACYCDu- et-1上, 在大肠杆菌BL21( DE3) 中异源表达, 采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白并测定其异戊二烯合成酶活性, 通过 摇瓶发酵实验对重组菌产异戊二烯进行进一步研究结果显示:银白杨异戊二烯合成酶在大肠杆菌中能够高效表 达, 经过镍柱纯化后, 电泳检测到特异性表达条带; 该重组异戊二烯合成酶能够催化异戊二烯的合成, 重组菌的异 戊二烯产量可达到 0 L g /L : 银白杨; 异戊二烯合成酶; 亲和层析 : Q812; Q78 : A : 1 72- 3 78(2011) 03- 000 - 05 Expression of isoprene synthase inE sch erich ia coli for isoprene production 1, 2 1 2 2 1 2 SU Sizheng , LIU Jianzhong, YANG Jianm ing , L IU W ei, WANG Q ian , X IAN M o ( 1. College of Chem ical Eng ineering and Technology, Wuhan Un iversity of Science andTechnology, W uhan 430081, Ch ina; 2. Q ingdao Institute of B ioenergy and B ioprocessTechnology, Chinese Academy of Sciences, Q ingdao 2 101, Ch ina) Abstract:TheP op ulus alba isoprene synthase ( IspS) w as optmi ized to the preferred codon usage ofE sch- erich ia coli, cloned into vector pACYCDuet-1 and then heterologously expressed inE. coli BL21 ( DE3). 2 + The recomb inant protein was purified by N i affinity chromatography and the enzym e activityw as deter- m ined in vitro. Isoprene production by the recomb inant strainw as evaluated by shake-flask fermentation.