执业兽医资格考试免疫学15免疫学技术演示幻灯片.pptVIP

常见的酶联免疫吸附试验 直接法 间接法 双夹心法 竞争法 ELISA检测抗原 Ag + Ab* ? Ag-Ab* ELISA检测抗体 检测对象 间接ELISA检测抗体 检测对象 夹心ELISA检测抗原 检测对象 第十五单元 免疫学技术概论 南京农业大学 张 炜 电话Email:vszw@njau.edu.cn 第1节 概 述一、免疫学技术的概念及分类 免疫学技术是利用抗原抗体特异性反应的原理建立的各种检测与分析技术，以及建立这些技术的各种制备方法。 分为 免疫血清学技术 免疫制备技术 细胞免疫技术 二、免疫血清学反应的特点及影响因素 一般特点 特异性与交叉性 抗原与抗体结合力 最适比例性 反应的阶段性 影响因素 电解质 温度 酸碱度 血清学反应具有高度特异性，如抗猪瘟病毒的抗体只能与猪瘟病毒结合，而不能与口蹄疫病毒结合。 若抗原之间含有部分共同抗原时，则发生交叉反应。 特异性与交叉性  抗原与抗体结合机理 抗原和抗体的结合为弱能量的非共价键结合， 其结合力决定于抗体的抗原结合位点与抗原表位之间形成的非共价键的数量、性质和距离， 可分为高亲和力、中亲和力和低亲和力抗体。 抗原与抗体在适宜的条件下就能发生结合反应。 但对于血清反应，只有在抗原与抗体呈适当比例时，结合反应才出现可见反应，在最适比例时，可见反应最明显 Ag浓度 Ag –Ab复合物 前带 后带 等价带 免疫血清学反应的影响因素 电解质 特异性的抗原和抗体具有对应的极性基（羧基、氨基等），它们互相吸附后，其电荷和极性被中和因而失去亲水性，变为憎水系统。此时易受电解质的作用失去电荷而互相凝集、发生凝集或沉淀反应。 温度：通常在37度 酸碱度：常用pH为6-8 三、细胞免疫技术的种类 淋巴细胞计数及分类技术 淋巴细胞功能测定技术 细胞因子检测技术 体内细胞免疫试验 四 免疫制备技术的种类 抗原制备 抗体制备 抗体纯化 抗体标记 抗原制备 常见的抗原种类：细菌、病毒及其亚组分 如果是活的微生物，还需要进行灭活处理 抗体制备 血清抗体制备 按一定的免疫程序对实验动物进行一次或多次免疫。 分离血清 五、 免疫学技术的应用 动物疫病的诊断 动植物生理活动研究 物种及微生物鉴定 动植物性状的免疫标记 生物制品研究 动物疫病致病机理研究 分子生物学研究 二，间接凝集试验 将可溶性抗原（或抗体）先吸附于一种与免疫无关的，一定大小的不溶性颗粒（统称为载体颗粒）的表面 然后与相应抗体（或抗原）作用，在有电解质存在的适宜条件下，所出现的特异性凝集反应称为间接凝集反应，以此建立的检测方法称为间接凝集试验（indirect agglutination test） 间接凝集反应原理： + + —载体：红 血 球： 间接血凝试验 乳胶颗粒：间接乳胶凝集试验 二、抗原或抗体的检测方法 第3节 沉淀试验 可溶性抗原 如细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液、病毒的可溶性抗原，血清等 与相应抗体结合，在适量电解质存在下，形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀试验（precipitation test） 参与的抗体主要是IgM和IgG。 沉淀试验可分为液相沉淀试验和固相沉淀试验 液相沉淀试验主要有环状沉淀试验和絮状沉淀试验等。 固相沉淀试验主要是琼脂扩散试验和免疫电泳试验。 (一)环状沉淀试验（ring precipitation test） 小口径试管中进行，先加已知血清0.1 ml，然后轻轻加入等量抗原， 形成二个界面，数分钟后，二个界面间形成乳白色的沉淀环。 如：炭疽环状沉淀反应: Ascoli 反应 （二）琼脂凝胶扩散试验 利用可溶性抗和抗体在半固体凝胶中进行反就，当抗原抗体分子相遇并达到适当比较时，就会互相结合、凝集，出现白色的沉淀线，从而判定相应的抗体和抗原。 双向双扩散（double diffusion in two dimension） 双向单扩散（simple diffusion in two dimension） 双向免疫扩散(double immunodiffusion)： ----定性检测Ag或Ab ； Ab效价滴定 Ag Ab 扩散 Ag Ab 扩散 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 （二）沉淀反应 三、免疫电泳技术 免疫电泳 对流免疫电泳 ３、免疫电泳 （immuno electrophoresis) + 标本先电泳 **** **** ****** *** ***** **** 两侧挖槽加Ab孵育后出现肉眼可见沉淀 - （二）沉淀反应 第4节 标记抗体技术 标记抗体技术是应用最为