[农林牧渔]DNA的粗提取与鉴定.pptVIP

目的要求 1、了解从细胞中提取DNA的基本原理 2、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法 3、观察提取出来的DNA 实验思路 1、DNA从哪提取？ 2、怎样将DNA与细胞中的其他物质分离？ 3、怎样鉴定我们提取的DNA？ 实验原理 1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 实验用具：铁架台；铁环；镊子；三角架；酒精灯；石棉网；载玻片；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒（100ml，一个）；烧杯；（100ml，一个，50ml、500ml各二个）；试管（20ml，二个）；漏斗；试管夹；纱布。 小结 1、DNA的粗提取与鉴定的方法 2、原理 3、实验设计的步骤，原则 1、在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是（ ） A .防止凝血 B. 加快DNA析出 C .加快DNA溶解 D.加速凝血 2、DNA的溶解度最低时，NaCl的物质的量浓度为（ ） A 2mol/l B 0.1mol/l C 0.14mol/l D 0.015mol/l 3、在向溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（ ） A 加快DNA溶解的速度 B 加快溶解杂质的速度 C 减小DNA的溶解度，加快DNA析出 D减小杂质的溶解度，加快杂质的析出 8、DNA遇二苯胺会染成（沸水浴） A 硅红色 B 红色 C 紫色 D 蓝色 讨论： 答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破 （1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会有什么变化？ （2）用玻璃棒搅拌有什么意义？ 答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA （3）滤去的是什么物质？得到的是什么？ 答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA ②溶解细胞核内的DNA 将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol的溶40mL加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态 沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol／L） ③析出含DNA的粘稠物 讨论：加入蒸馏水的目的？ 降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点，使DNA从NaCl溶液中析出 将溶液中的DNA与其他杂质分离，这一步骤是实验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNA分子的附着和缠绕 注意事项： ④滤取含DNA的粘稠物 用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中，含 DNA的粘稠物被留在纱布上 ⑤将DNA的粘稠物再溶解 取 1个 50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L的溶液 20mL。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中 ⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液 取1个100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中 ⑦提取含杂质较少的DNA 在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为 95％的溶液 50mL（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA * DNA的粗提取与鉴定 垦利一中生物组 李锋熙 3.蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 4.大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性 5.洗涤剂可以瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 6.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 实验材料和用具 实验材料： 1、鸡血细胞液（5~10ml）； 2、体积分数为95%的冷酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却24h）； 3、蒸馏水； 4、质量浓度为0．１g/ml的柠檬酸钠溶液； （抗凝剂） 5、物质的量浓度分别为2mol/L和0．015mol/L的NaCl溶液； 6、二苯胺试剂。 8、DNA的鉴定 ① DNA与二苯胺（沸水浴）会