第十四章 肝脏功能检验.ppt

3. 样本存放时间 在室温（25℃）可维持2d，在4℃冰箱可维持1周。在－25℃可维持1个月 试剂空白 自身血清的对照管 样本对照管 4. 血清对照 5. 丙酮酸钠的纯度对曲线的影响 6. 加入2，4-二硝基苯肼溶液后，应充分混匀，使反应完全。 加入氢氧化钠溶液的速度要一致，减少吸光度管间的差异。 7.称量必须准确 方法评价 重复性差 底物α-酮戊二酸用量不足 2，4-二硝基苯肼在碱性条件下也能显色 产物旁路效应 2. 准确性差 3. 试剂稳定性差 4. 操作简便 二、氨基转移酶测定的意义 肝细胞中含量最多，其次是肾脏和心脏，通常只有极少量释放入血液，所以血清中此酶的活力很低，当这些组织病变时，细胞坏死或通透性增加，细胞内酶大量释放入血，使血清中该酶活力显著增高 1. 血清ALT活性增高 肝胆疾病 骨骼肌疾病 一些药物和毒物可引起ALT活性升高 2．血清AST活性增高 心血管疾病 各种肝病均可引起血清AST的升高 第三节 血清碱性磷酸酶测定 一、测定方法简介 一组非特异性的在碱性条件下水解磷酸酯的酶类 底物: β-甘油磷酸钠 磷酸苯二钠 对硝基酚磷酸盐 酸酚酞 α-萘酚磷酸盐 4-甲基伞形花内酯酰磷酸盐 碱性磷酸酶: 测定方法: （一）测定水解释放的无机磷 鲍氏（Bodansky）法 （二）测定底物水解后的羟基化合物 1. 羟基化合物需与显色剂作用后比色测定 金氏（King）法 2. 羟基化合物在碱性条件下直接显色测定 对硝基酚磷酸盐（p-nitrophenyl phosphate, 4-NPP）法 金氏法测定血清碱性磷酸酶 ALP在碱性条件催化磷酸苯二钠水解，释放出酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色的醌类化合物，根据红色的深浅与校准酚比较，确定ALP的活性。 原理: 参考范围： 单位定义： 灵敏度较高，显色稳定，不需去蛋白，操作简单、快速准 确度和精密度都较低,受胆红素和溶血的干扰 方法评价： 100ml血清在37℃与底物作用15min，产生1mg酚为1个金氏单位 成人 3～13金氏单位，儿童 5～28金氏单位 速率法测定血清碱性磷酸酶 原理: 以对-硝基苯酚磷酸钠（4-NPP）为底物， AMP或二乙醇胺（DEA）为磷酸酰基的受体。在碱性条件下，ALP催化4-NPP水解释放出磷酸基团，生成游离对-硝基酚（p-nitrophenol, 4-NP），4-NP在碱性溶液中转变成醌式结构，呈现较深的黄色。根据405nm处吸光度增加的速率（△A/min）推算出清ALP活性单位。 计算： 参考范围： 40～160 U/L （37℃） 灵敏度高、线性范围宽（500U/L以上）和精密度高 方法评价： 二、碱性磷酸酶测定的意义 分布：广泛存在于各器官组织中，尤以肝脏、骨骼、小肠和肾脏含量较高，血清中ALP主要来自肝脏和骨骼 病理性增高： 肝胆疾病：阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸型肝炎、肝癌 骨骼疾病：佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈合期 生理性增高：妊娠期与儿童生长发育期 第四节 血清γ-谷氨酰转肽酶测定 一、测定方法简介 γ-谷氨酰基转移酶（γ-glutamyl transferase，GGT) （一）重氮比色法 （二）速率法 测定方法: 速率法测定血清γ-谷氨酰基转移酶 GGT催化γ-谷氨酰基移换反应。以L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺为底物，双甘肽为谷氨酰基的受体，在GGT的催化下，谷氨酰基转移到双甘肽分子上，同时释放出黄色的2-硝基-5-氨基苯甲酸，根据405nm处吸光度增加的速率（△A/min）推算出GGT活性单位 原理： * * * * 第十四章 肝脏功能检验 本章内容概要： 第一节 概 述 第二节 血清氨基转移酶测定 第三节 血清碱性磷酸酶测定 第四节 血清γ-谷氨酰转肽酶测定 第五节 血清胆红素测定 第六节 血清胆汁酸测定 第七节 肝功能试验的选择原则 掌握 肝功能试验的意义及评价，赖氏法、速率法测定ALT，改良J-G法和胆红素氧化酶法测定胆红素的原理、注意事项及主要临床意义。 熟悉 金氏法、速率法测定ALP，GGT测定方法、酶比色法测定血清胆汁酸的原理、注意事项及主要临床意义。 了解 肝脏的结构特点及生物化学功能，某些肝病的生物化学。 本章教学要求： 第一节 概 述 肝脏的结构特点 肝脏的生物化学功能 某些肝脏疾病的临床生化 肝功能试验的分类 一、肝脏的结构特点 双重的血流输入系统 双重的输出系统 肝细胞的亚细胞结构特点 肝细胞的再生 （一）肝脏具