第七章 细菌耐药性检测.ppt

研究细菌耐药性的目的 1、指导医生及有关专业人员合理用药 2、指导药物学家研究开发新药 抗菌药物发现史上几个重要的里程碑 1929年，英国细菌学家Flemin发现微生物的拮抗作用，提示具有临床化疗的可能性。 1940年，Chain和Florey接受美国政府的邀请，进行青霉素的研究开发，成功用于临床，开创了化疗新时代。 抗生素时代的开创——青霉素的发现 . 抗菌药物发现史上几个重要的里程碑 1932年，德国药物学家Domagk发现百浪多息—第一个磺胺类药物，使现代医学进入化疗新时代。 1942年，美国科学家Waksman发现链霉素，奠定了从微生物代谢产物中寻找抗生素的基础，造就了抗生素发展的黄金时代。 抗菌药物发现史上几个重要的里程碑 1959年，英国科学家Chain利用大肠杆菌酰胺酶，从青霉素制备中间体6APA获得成功，开创了半合成抗生素的新时代。 1973年，应用超敏感菌筛选模型获得β-内酰胺酶抑制剂，有效地控制了耐药菌引起的感染。 不同抗菌药物的三种作用模式 细菌耐药性的生物化学机制 灭活酶和钝化酶的产生 1.β-内酰胺酶 水解药物β-内酰胺环使酰胺键断裂而失去抗菌活性 。 2.氨基糖苷类钝化酶 有3类：乙酰转移酶(AAC)、磷酸转移酶(APH)、核苷转移酶(AAD)，分别通过乙酰化作用、磷酸化作用、核苷化作用灭活此类抗生素。 3.氯霉素乙酰转移酶 4.红霉素酯酶和其他灭活酶 细菌耐药性的生物化学机制 抗菌药物渗透障碍 对革兰阴性菌而言，外膜的通透性对药物进出菌体至关重要。亲水性的药物通道蛋白为OmpF 、OmpC 和PhoE。抗生素可以直接扩散进入膜内并到达菌体内相应作用部位 。疏水性越强的抗生素 、带负电荷越多的抗生素分子 、较大的药物分子也不易通过 。外膜蛋白的缺失可导致细菌耐药性的发生 。 细菌的外膜上特殊的药物泵出系统 使菌体内的药物浓度不足导致耐药 。铜绿假单胞菌外膜上有一种蛋白OprK，泵出多种抗生素 ，是产生耐药的重要机制 。 细菌耐药性的生物化学机制生物膜形成 生物膜基质是细菌分泌的多聚物质、吸收的营养物、代谢产物、细胞溶解产物和当时周围环境中的微粒材料和碎石组成的复合体。 生物膜基质中的胞外多聚物可与抗菌药物作用，通过阻止药物进入生物膜的屏障作用或吸附抗菌药物有效减少药物浓度，从而保护生物膜内的细菌。 另外，生物膜内相互靠近的细菌，通过耐药质粒的转移使细菌产生耐药性。 细菌耐药性的生物化学机制 药物作用靶位的改变 通过靶位的改变使抗生素不易结合，是耐药发生的重要机制。 1.核糖体靶位酶亲和力的改变导致对四环素、红霉素、喹诺酮、氨基糖苷类、甲氧嘧啶、磺胺类抗生素耐药 。 2.核糖体位点的改变引起对大环内酯类和林可霉素类抗生素耐药 。 3. DNA螺旋酶的改变是对喹喏酮类抗生素耐药的重要机制 。 细菌耐药性的生物化学机制 药物作用靶位的改变 4.核酸合成途径中序列靶位酶的改变 对磺胺-甲氧嘧啶耐药，二氢叶酸还原酶改变致甲氧嘧啶耐药。 5. PBP发生改变 , β-内酰胺类抗生素不能结合或亲和力降低，则产生耐药，如金黄色葡萄球菌中PBP转变为PBP2a。大肠埃希菌中PBP3改变，引起对头孢氨苄和其他头孢抗生素耐药 。 6.肠球菌van基因编码产生肽聚糖上一种前体蛋白，阻碍万古霉素和肽链间相互作用而导致耐药。 抗生素敏感性试验概述 目的 检测细菌的敏感性，指导临床用药？ 检测细菌的耐药性，预测临床结果？ AST 目的 检出细菌对抗生素的耐药性， 预测临床治疗结果 预测 不是指体外测得的数据， 强调对数据的解释 临床 不是指体外AST的结果， 强调病人用药后的疗效 治疗结果 用成功或失败衡量， 强调实验室与临床的统一 AST AST 重要性 如果没有细菌耐药性检测 治疗过度：用药不当，过度使用高档抗生素 治疗错误：用药错误，危重患者丧失抢救时机 增加不必要的副作用 增加不必要的费用 增加细菌的耐药性 降低医疗服务的质量 AST  方法 （1）手工试验 1.纸片扩散法（S，I，R） 2.稀释法（MIC） 3.E test（MIC） （2）自动仪器 Vitek，Microscan， Phoenix （3）分子试验 PCR直接