选修三2-2动物细胞工程-唐海.pptVIP

动物特异性免疫 分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。） 第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 提取单克隆抗体。 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选,继续培养 单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选,继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选,继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 单克隆抗体制备过程 体外培养 注射到小鼠腹腔 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选,继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 单克隆抗体 单克隆抗体制备过程 体外培养 注射到小鼠腹腔 杂交 细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 单抗的制备过程要点： 5.过程： 动物细胞A 动物细胞B 诱导，融合 5.过程： 动物细胞A 动物细胞B 诱导，融合 1个完整的杂交细胞AB 5.过程： 动物细胞A 动物细胞B 诱导，融合 1个完整的杂交细胞AB 　　注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞 6.意义： 　　突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 6.意义： 　　突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 7. 应用： 　　成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 　　特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体 植物体细胞杂交和动物细胞融合得比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 细胞融合的原理 细胞融合的方法 诱导方法 用途 意义 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 去处细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 物理（离心、振荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 物理、化学方法（同左） 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体 解决远源杂交不亲和的问题 1.什么是抗体？ 2.抗体是由何种细胞产生的？ 1.什么是抗体？ 2.抗体是由何种细胞产生的？ 抗体是具有免疫作用的蛋白质。 1.什么是抗体？ 2.抗体是由何种细胞产生的？ 抗体是具有免疫作用的蛋白质。 B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。 B淋巴细胞与抗体的关系： B淋巴细胞与抗体的关系： 　　1. B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。 　　2. 每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 B淋巴细胞与抗体的关系： 　　1. B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。 　　2. 每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 　　传统的抗体生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？ 常规抗体的缺陷 常规抗体的缺陷 动物体内 刺激 浆细胞 抗体 抗原 常规抗体的缺陷 动物体内 刺激 浆细胞 抗体 抗原不纯 抗体不纯 抗原 常规抗体的缺陷 动物体内 刺激 浆细胞 抗体 抗原不纯 抗体不纯 特异性差、纯度低； 抗原 常规抗体的缺陷 动物体内 刺激 浆细胞 抗体 抗原不纯 抗体不纯 筛选单一浆细胞 特异性差、纯度低； 抗原 常规抗体的缺陷 动物体内 刺激 浆细胞 抗体 抗原不纯 抗体不纯 筛选单一浆细胞 特异性差、纯度低； 不能增殖产生大量抗体 抗原 常规抗体的缺陷 动物体内 刺激 浆细胞 抗体 抗原不纯 抗体不纯 筛选单一浆细胞 特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏 不能增殖产生大量抗体 抗原 一、单克隆抗体的概念 　　由单个B