[]糖基转移酶和糖苷酶.ppt

(1) ?-N-乙酰葡糖胺内切酶 按其来源和底物专一性的差别，共分四种。 (1)它们都能水解N-型糖中紧挨着天冬酰胺的两个N-乙酰葡糖胺之间的?-1,4连接键。 (2)Endo-D和Endo-C1的底物专一性完全相同。 都要求在糖基一侧有一个三碳结构。非还原末端的?-甘露糖残基必需没有被其他糖取代。 ?-N-乙酰葡糖胺内切酶 (3)indo-H的底物专一性，在糖基一例要求一个四糖结构: 非还原末端的?-甘露糖必需是，或者不被取代、或者是仅仅取代在C-2位置上。 卵清蛋白糖肽的一条糖链 ?-N-乙酰葡糖胺内切酶 (4)Endo-C11的底物专一性，在糖基一侧要求一个分枝的五糖单位，并且两个处于还原末端的?-甘露糖残基都必需、或者不被别的糖基取代，或者仅取代在C-2位置上。 Endo-C11在糖苷配基一侧的专一性要求，和Endo-H一样，不容许有岩藻糖的取代。 (2) ?-N-乙酰半乳糖苷内切酶 蛋白的O-型糖链中最常见的一种，是由糖链还原末端的N-乙酰半乳糖胺和糖链中的丝氨酸或苏氨酸的羟基以?-0-糖苷键连接而成。?-N-乙酰半乳糖胺内切酶能够切开这个连键，把0-型糖链和肽链完全分开。 (3) ? -半乳糖苷内切酶 糖基一侧必须是一个三糖单位，失去非还原末端的半乳糖-乙酰半乳糖胺，都不能成为该酶的底物。 糖苷配基一侧必须是N-乙酰葡糖胺或葡萄糖。 被酶水解打开的糖苷键必须是?-1,4连接。 这个内切酶只能用于带有血型A(或B)决定簇的糖链，能作用于血型物质H。 (4) 其他内切糖苷酶 来自灰色链霉菌发酵液的一个氨基半乳糖苷内切酶，可以水解?-氨基半乳糖苷键。用于一种真菌所产生的氨基半乳聚糖的结构研究。 来自一株土壤芽孢杆菌的?-1,6甘露聚糖酶，能水解无侧链取代的?-1,6甘露糖糖苷键，在研究酵母胞壁外层甘露聚糖结构时，将大分子甘露聚糖外侧链打断，获得靠近天冬酰胺结合位置的内核结构。 4、应用中的问题 在应用糖苷酶进行糖链结构研究时，所取得的实验结果，应对照其他技术方法提供的信息，小心加以解释，以免引出错误的结论。 影响糖苷酶测定结果的因素很多，大致有以下几个方面： (1) 工具酶的选择 任何一助糖苷酶都可用于糖链结构研究的工具酶。 一般应选择文献中常用的，底物专一性清楚的糖苷酶作为工具酶。 一种新分离纯化的糖苷酶，应该用各种常见的糖苷键结构类型作底物，做一系列酶活性测定，确定其底物专一性，然后才能用做工具酶。 (2) 工具酶的纯度 所采用的工具酶不应混杂有别的酶。 如果有少量蛋白酶没有除尽，则可能在酶反应中将所用的工具酶水解掉，使糖链水解过程中断，并使产物中混入不应有的杂质，结果分析带来困难。 如果有少量别种的糖敢酶掺杂在工具酶中，有可能带来错误的实验结果。 (3) 遮蔽效应 按照其他技术方法得到的信息，选择了一个合适的糖苷酶，可得不到预期的结果。 可能是预先得到的信息有错误。 可能是另一个原因，底物结构较为复杂，造成了分子的空间遮蔽效应。 (4) 其他方面 在应用糖苷酶于糖链结构分析，遇到意料之外的负结果时，应考虑以下几种情况。 (1)底物是否充分溶解了? 有的样品在水溶液中溶解不好，尤其是糖脂和膜结合糖蛋会极大地影响糖苷酶的水解效果。 适当地加入去污肌可增强糖昔酶对糖脂的水解。 其他方面 (2)是否有抑制剂存在? 在复杂的无细胞制剂系统中，抑制剂存在的可能性更大。 要考虑底物抑制或单糖抑制的可能性。 (3)是否遇到了不常见的呋喃糖环? 因为绝大多数工具糖苷酶，是专一于吡喃环形式的。 ?-L-岩藻糖苷酶测定的临床应用 ?-L-岩藻糖苷酶是一种溶酶体酸性水解酶。 以往主要用于遗传性AFU缺乏引起的岩藻糖贮积病的诊断。 近年来发现，?-L-岩藻糖苷酶测定对肝癌的诊断具有较高的敏感性和特异性。 动态监测有利于肝癌的早期诊断、鉴别诊断, 并可作为转移、复发的指标，也可用于白血病及卵巢癌的诊断。 葡萄糖苷酶可以使白葡萄酒的香气提高 葡萄酒的香气和味道是受联结在一起的非易失性的化合物影响的，它可以被葡萄糖苷酶所损坏。 内切木聚糖酶与木糖苷酶预处理 对麦草浆漂白性能的影响 结果表明，无论是内切木聚糖酶还是木糖苷酶预处理漂白浆的白度均比对照浆高，分别高出对照浆的2. 5 和1. 9 个百分点，同时漂白浆的强度也好于对照浆的强度。 内切木聚糖酶和木糖苷酶混合预处理漂白浆的白度分别比内切木聚糖酶和木糖苷酶高出0. 9 和1. 5 个百分点，这表明内切木聚糖酶和木糖苷酶在纸浆预处理过程中具有协同作用。 血浆壳三糖苷酶活性与冠状动脉病变密切相关 对126例冠状动脉造影术患者按冠状动脉狭窄程度分组，将狭窄程度 50%者列为对照组，≥50%者列为病变组，比较各组血清壳三糖苷酶及血脂等指标，进行统计学分析。 结果发现，病变组血清壳