[理学]核酸基础生物化学.docVIP

第六章 核 酸 第一节 概述 一发现 1868年瑞士医生Miescher（米歇尔）从外科绷带脓细胞的细胞核中分离得到一种含磷很高的酸性物质，当时称它为“核素”，实际就是核酸和蛋白质的复合物。之后在很长时间内，流行“四核苷酸假说”，认为核酸是由等量的四种核苷酸构成的，不可能有什么重要功能。 1928年英国的细菌学家F.Griffith（格里菲斯）肺炎双球菌的转化现象。肺炎双球菌(Diplococcus pneumoniae)是一种病原菌，存在着光滑型(Smooth简称S型)和粗糙型(Rough简称R型) 两种不同类型。其中光滑型的菌株产生荚膜，有毒，在人体内它导致肺炎，在小鼠体中它导致败血症，并使小鼠患病死亡，其菌落是光滑的；粗糙型的菌株不产生荚膜，无毒，在人或动物体内不会导致病害，其菌落是粗糙的。格里菲斯将活的粗糙型菌和加热杀死的光滑型菌混合液注射小鼠，可致病，而二者单独注射都无致病性。这说明加热杀死的光滑型菌体内有一种物质使粗糙型菌转化为光滑型菌。 肺炎双球菌转化实验的结论：加热杀死的S菌中有一种“转化因子”，能使R菌转化为S菌，使小鼠死亡。格里菲斯没有对此现象进行进一步的研究。但这个实验为以后认识到 DNA 是遗传物质奠定了基础。 1944年美国的O．Avery(弗)、麦克利奥特(C. Macleod)及麦克卡蒂(M．Mccarty)等人在格里菲斯工作的基础上，对转化的本质进行了深入的研究（体外转化实验）证明DNA是遗传物质，蛋白质不是遗传物质。他们从S型活菌体内提取DNA、RNA、蛋白质和荚膜多糖，将它们分别和 R型活菌混合均匀后注射人小白鼠体内，结果只有注射S型菌DNA和R型活菌的混合液的小白鼠才死亡，这是一部分 R型菌转化产生有毒的、有荚膜的S型菌所致，并且它们的后代都是有毒、有荚膜的。实质是S型的DNA或基因与R型活细菌DNA之间重组,使后者获得了新的遗传信息。 外源DNA分子一旦找到它的内源同源体，这两个分子就可进行遗传交换了。交换的结果是使外源DNA被整合，而使同源的内源DNA分子从R型细菌的DNA中排斥出去，从而产生由R型细菌变为S型细菌的遗传转化。 由此说明RNA、蛋白质和荚膜多糖均不引起转化，而DNA却能引起转化。如果用DNA酶处理DNA后，则转化作用丧失。 艾弗里于1944年发表论文指出脱氧核糖型的核酸是肺炎球菌转化要素的基本单位。 其实验证据如下： 1.纯化的、有高度活性的转化要素的化学元素分析与计算出来的DNA组成非常接近。 2.纯化的转化要素在光学、超速离心、扩散和电泳性质上与DNA的相似。 3.其转化活性不因抽取去除蛋白质或脂类而损失。 4.用胰蛋白酶和糜蛋白酶处理不影响其转化活性。 5.用RNA酶处理也不不影响其转化活性。 6. DNA酶可使其转化活性丧失。 艾弗里的论文发表后，有些人仍然坚持蛋白质是遗传物质，理由是： （1）因认为蛋白相对分子质量大，结构复杂，二十种氨基酸的排列组合将是个天文数字，可作为一种遗传信息。而DNA相对分子质量小，只含4种不同的碱基，人们一度认为不同种的有机体的核酸只有微小的差异。 （2）认为转化实验中DNA并未能提得很纯，还附有其它物质。 （3）即使转化因子确实是DNA，但也可能DNA只是对荚膜形成起着直接的化学效应，而不是充当遗传信息的载体。 1952年A.D.Hershey赫尔希和M.Chase蔡斯的T2噬菌体感染实验进一步证明了DNA是遗传物质的结果。T2噬菌体是一类专门寄生在细菌体内的病毒，具有蝌蚪状外形，头部呈正20面体，外壳由蛋白质构成，头部包裹DNA作为遗传物质。他们用35S标记蛋白质，用32P标记核酸。使标记的噬菌体感染大肠杆菌，经短期保温后，噬菌体就附着在细菌上。然后用搅拌器（10000转/分）搅拌几分钟，使噬菌体与大肠杆菌分开，再用高速离心机使细菌沉淀，分析沉淀和上清中的放射性当用35S标记的噬菌体感染时，放射性只存在于细胞外面，即噬菌体的外壳上；当用32P标记的噬菌体感染时，放射性在细胞内，说明感染时进入细胞的是DNA，只有DNA是连续物质，所以说DNA是遗传物质。 1950年Chargaff,E和Hotchkiss,R.D.采用纸层析法仔细分析了DNA的组成成分, 得知[A]=[T], [G]=[C], [A+G]=[C+T] 1953年WatsonCrick在前人研究工作的基础上根据DNA的X射线图谱的研究结果, 提出了DNA的双螺旋模型(Double helix)。这被认为是20世纪中最伟大的成就之一，给生命科学带来了深远的影响，并为分子生物学的发展奠定了基础。几星期后提出了半保留式复制模型。 1956年，Fraenkel Conrat的烟草花叶病毒（TMV）重建实验证明，RNA也可以作为遗传物质。把TMV在