[理学]生物化学实验方法及常用仪器介绍.ppt

离心技术简介 离心（centrifuge） 离心是利用旋转运动的离心力以及物质的沉降系数或浮力密度的差异进行分离、浓缩和提纯的一种方法。 离心技术是利用离心力对混合液（含有固形物）进行分离和沉淀的一种技术。 离心技术简介 离心分离是制备生物样品广泛应用的重要手段，可以分离： 活体生物（细胞、微生物、病毒） 细胞器（细胞核、细胞膜、线粒体） 生物大分子（核酸、蛋白质、酶、多聚物） 小分子聚合物 离心技术的发展 1911-1912年，开始生产和使用低速（3,000 rpm以下）的商品化台式离心机 离心技术的发展 1929年，Lamm完成了沉降方程。计算了沉降速度。定义了沉降系数 1940 年，Svedberg与Pederson出版了世界上第一本有关离心技术的专著 1943年，Pickels研制成现代固定角式离心转子 离心技术的发展 1951年，Brakke在差速离心的基础上发展了速率区带离心法。Kahler研制成功甩平转子； 1955年，Anderson发明了区带转头，并用区带离心法首次证明了DNA双螺旋结构半保留复制的假说； 1955年以后，开始了超速、高速、低速大容量离心机以及分析用超速离心机的商品化生产 离心技术的发展 1957-1959年，Meselson、Duve等开发了等密度离心法。 1964－1966年，Anderson等开始建立转子区带离心技术并开发了低、高、超速区带转头。 1975年，垂直管转子被开发并用于Dupont-Sorvall油透平驱动的超速离心机。 1981年，美国Beckman公司开发的用于细胞离心纯化的“淘洗”转头供应市场。 …… 离心技术原理 1. 离心力 Centrifugal force (F) F=??mω2r 其中：m?—?沉降粒子的有效质量； ω?—?粒子旋转的角速度； r?—粒子的旋转半径(cm) ω= —— (rad/sec) 离心技术原理 2. 相对离心力 Relative centrifugal force (RCF) RCF 就是实际离心力转化为重力加速度的倍数 RCF=F离心力/F重=mω2r/mg=ω2r/g ω= —— (rad/sec) RCF= 4?2 n2r/3600g=1.12×10-5 n2r 其中： n－每分钟的转数(rpm) 离心技术原理 只要给出旋转半径r，?则RCF和rpm之间可以相互换算。 由于转头的形状及结构的差异，使每台离心机的离心管，从管口至管底的各点与旋转轴之间的距离是不一样的，所以在计算时规定旋转半径均用平均半径“rav”代替： rav?=(r?min+r?max)/2? 离心技术原理 3. 沉降速度（Sedimentation velocity） 指在强大离心作用下，单位时间内物质运动的距离。 ? = d2 (? - ?) g / 18? Stokes方程 其中： ?－颗粒的沉降速度 d－颗粒直径 ?－颗粒密度 ?－介质密度 ?－介质的粘度 离心技术原理 4. 沉降系数（sedimentation coefficient，S） 颗粒在单位离心力作用下的沉降速度称为该颗粒的沉降系数，把10-13秒作为一个单位，称为斯维得贝格单位，或称沉降系数单位，用S表示。 离心技术原理 例如： 溶菌酶的沉降系数为2.15×10-13 s，通常叫做2.15 S；过氧化氢酶的沉降系数为11.35×10-13 s，就称11.35 S；大肠杆菌核蛋白体是70 S，由两个亚基组成，用超离心方法测其沉降系数分别为30 S和50 S。 离心技术原理 离心机结构 离心机分类 离心机分类 离心机分类 1、低速离心机?? 最大转速4000～7000rpm左右，最大相对离心力近2220～9420g ，容量为几十毫升至几升，分离形式是固液沉降分离，转子有角式和外摆式，其转速不能严格控制，通常不带冷冻系统，于室温下操作。 用于收集易沉降的大颗粒物质，如红血球、酵母细胞等。 离心机分类 2、高速冷冻离心机? 最大转速为15000～26000rpm左右，最大相对离心力为16100～801100g，最大容量可达3升，分离形式也是固液沉降分离，转头配有各种角式转头、水平式转头、区