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硒对胡萝卜发芽率以及苗期生长和生理生化指标的影响王 芳 (化学与生命科学学院 08生物科学班)指导老师: 李红侠 摘要：利用土培实验，以胡萝卜作为研究材料，研究了不同浓度硒对胡萝卜种子发芽率和硒对胡萝卜苗期生长和生理生化指标的影响。结果表明，（当硒离子浓度为 0.5 mg/L时胡萝卜种子的发芽率最大。同时，当硒浓度为0.5mg/L时，胡萝卜叶片的叶绿素含量、过氧化物酶含量、过氧化物歧化酶含量都都达到最大值，大于1.0 mg/L时各项指标均逐渐降低。） 关键词 胡萝卜； 硒；超氧化物酶含量；叶绿色含量；过氧化物酶含量 引言 硒是人类、动物必需的微量元素，硒缺乏会导致人群中出现大骨节病等症状，也会使动物出现白肌病等相关疾病。硒通过食物链的形式被人类、动物摄取，进而影响其健康状况。植物中的硒含量受其土壤中和外界对其施加的量有关，硒在植物体内的转化量也受到影响和制约。近年来,在植物领域中关于硒与生命有机体生长发育的关系研究逐步受到人们的关注,硒在油菜、烟草、马铃薯等方面的研究较多，而在胡萝卜方面的研究报道较少。 本课题以胡萝卜作为试验材料，使用不用浓度的硒离子对胡萝卜幼苗进行培养。研究了胡萝卜的该实验以胡萝卜种子为材料研究不同硒浓度下对胡萝卜幼苗生长的影响，旨在探索适宜的硒浓度来更好的促进胡萝卜生长。 主要研究不同浓度的硒对胡萝卜幼苗的过氧化物歧化酶、过氧化物酶、叶绿素等生理生化指标的影响，以期为胡萝卜的适宜生长的硒浓度环境及将来开发富硒产品提供一定的理论依据。 1材料和方法 1.1 实验材料 胡萝卜 1.2 试验仪器设备与试剂 1.2.1仪器设备：722-型分光光度计；离心机；分析天平；剪刀；研钵；等。 1.2.2主要试剂：丙酮、石英砂；愈创木酚、30%过氧化氢；甲硫氨酸、EDTA、PBS、磷酸缓冲液、核黄素等。 1.3 实验方法 1.3.1胡萝卜种子的预处理及培养 从购买的胡萝卜种子中选取颗粒饱满、无损伤的种子用10%的过氧化氢消毒15分钟，用去离子水反复清洗4-5次后,将胡萝卜种子放入预先准备好的培养皿中培养，每个培养皿中放入50粒饱满胡萝卜种子，贴好标签。培养皿中培养液的硒浓度分别为(0.0 、0.5、1.0、10、20、50、100) mg/L，共设七个处理，每种处理两个个重复，然后在室温下培养。 1.3.2 胡萝卜种子发芽势和发芽率的计算 发芽势（%）=% 发芽率（%）=% 1.3.3 胡萝卜幼苗生理指标测定 1.3.3.1 叶绿素的提取和测定 叶绿素含量测定[4]:用722型分光光度计，采用丙酮法提取叶片中的叶绿素进行测定 (1) 色素的提取 ：准确称取胡萝卜叶片0.5 g，剪碎于研钵中，加入5 mL80%丙酮，少于碳酸钙和石英砂研磨，充分碾碎后过滤并将滤液置于20 mL的量筒内，用80%丙酮定容至刻度线。 （2）测定光密度 ：将叶绿素提取液倒入厚度为1 cm的比色皿中，将波长分别调至663 nm，645 nm处，以80%丙酮调零，测定两波长处的光密度值。 （3）按公式CT=Ca+Cb=8.02OD663+20.21OD[5]645计算出叶绿素含量 1.3.3.2过氧化物酶活性的测定 过氧化物酶活性的测定采用比色法 过氧化物酶活性的测定：用722分光光度计，采用比色法测定过氧化物酶活性 （1）粗酶液的提取 称取胡萝卜1.0g，加20mmol/LKH2PO4 5ml,于研钵中研磨成匀浆，以4000r/min离心15min,收集上清液保存在冷处，所得残渣再用5mlKH2PO4溶液提取一次，合并两次上清液。 （2）酶活性的测定 取光径1cm的比色杯2只，于一只中加入反应混合液3mlKH2PO4ml,作为校零对照，另一只中加入反应混合液3ml，上述酶液1ml（如活性过高可适当稀释），立即开启秒表计时，于分光光度计时，于分光光度计470nm波长下测OD值，每隔1min读数一次。以每分钟OD变化值表示酶活性大小，即以△OD470/min·mg蛋白质（或鲜重g）表示。 1.3.3.3超氧化物歧化酶活性的测定 超氧化物歧化酶活性测定采用比色法 （1）粗酶液提取 分别取经处理和正常组样品下的的胡萝卜叶片 2结果与分析 2.1不同浓度的硒浓度对胡萝卜种子的发芽势、发芽率的影响 表1 不同浓度的硒处理对胡萝卜种子发芽率和根长的影响 Effect of on germination rate and root length of carrot 处理 发芽势 发芽率 根长 CK 20% 70% 1.25cm Se 0.5 30% 76.67% 1.22cm Se 1.0 23.33% 70% 1.56cm Se 10 20% 56.67% 0.56cm Se 20 43.33% 16.67% 0.35c