03-DNA的复制.pptVIP

中国科学院上海生化与细胞所2002年招收硕士研究生分子遗传学入学考试： 请设计一个实验来证明DNA复制是以半保留方式进行的（8分）。 实验证据（1958 Meselson 和Stahl）： A replication eye forms a theta structure in circular DNA. 第四节 DNA复制的中止 五、转座子的遗传效应 诱变效应 切除效应 双转座效应 位置效应 转座爆炸 Tn10转座到一个新的DNA靶点时，在靶点两侧形成倒转重复序列。 (-) 2002年上海生化与细胞所 中国科学院遗传与发育生物学研究所1996年硕士研究生分子遗传学入学试题 转座子（transposon） 反转录转座子（retrotransposon） a) Tn / TnA family l 具有IR、转座酶基因、 调节基因（解离酶）、抗抗生素基因 l??????? Tn1 (AmpR) Tn2 (AmpR) Tn3 (AmpR) Tn4 (AmpR StrR) Tn5 (KanR) Tn6 (kanR) Tn7 (StrR TmpR) Tn9 (CamR) Tn10 (TetR) 2.5 kb 20 kb Tn3 IR TnpA Res TnpR AmpR IR 38bp 38bp 转座酶 regulator β- 内酰胺酶 2、复合转座子 ? 两种类型 b）两端重复序列为IS的复合转座子 e.g. IS插入到功能基因两端，可能形成复合转座因子 IS IS IS IS L IS R 臂 中心区 臂 transposition ? 当两个IS组件相同时，其中任一个都可行使转座功能 ? 不同时，主要依靠一个 3 转座噬菌体 Mu phage （巨型转座子 ） C repressor for A, B B 33 kd 与转座有关 A 70 kd 转座酶 U, S 毒性蛋白 attL, attR 与寄主同源，反向重复，转座必需 Gin G区倒位酶 att L C A B S U att R 150bp 1.5kb G 倒位区 38kb P gin ? 以E.coli为寄主的温和型噬菌体（溶源、裂解） ? Mu的插入途径 a） 侵入的Mu在溶源化过程中任意插入寄主DNA （两侧各5bp的靶位点序列重复） b） 进入裂解生长后，复制产生后代Mu DNA几乎全部插入寄主 DNA中，并可继续转座（形成寄主DNA和Mu的共合体），噬 菌体成熟时，切段共合体包装 三、转座子的转座机制及模式 ? 三种类型：复制型、非复制型和保守型 1、复制型转座模式 ? 实质：转座子元件被复制并被移动到受体位点，最终转座过程 扩增了转座子的拷贝（供、受点） ? 需两种酶： 转座酶（作用于原拷贝两末端） 解离酶（作用于复制后的拷贝） ? 模式： ? 两大步 a) 共合体形成 切口－连接－复制 b) 拆分 靶位点的DR形成 2、非复制型转座模式 ? 供体上最终产生双链断裂 ? 供体位点如不能被修复则有致 死效应 3、保守型转座模式 ? 另一种非复制型 ? 与λ整合机制相似 其转座酶与λ整合酶家 族有关 真核生物的转座成分根据转座机制目前分为两类： a) 剪贴式转座子（转座机制与细菌的转座子类似） 遗传信息： DNA→DNA ?