[高二理化生]现代生物科技专题复习纲要学生用.docVIP

现代生物科技专题复习纲要（四） 专题一 基因工程 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。 【知识结构体系】 【知识要点】 一、基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） 原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列（一般由4～8个核苷酸组成），并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。。 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，如EcoRI、SmaI限制酶识别序列均为6个核苷酸，也有少数限制酶的识别序列由4、5或8个核苷酸组成。 如EcoRI限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切割。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 【问题】为什么限制酶不能将自己的DNA分子剪切掉？ DNA分子不具备该种限制酶的识别切割序列；通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使了限制酶不能切开。 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 1、作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，使两段双链DNA片段拼接成新的DNA分子。DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列没有专一性要求。 2、种类： 常用类型 E·coli??DNA连接酶 T4?DNA连接酶 来源 大肠杆菌 T4噬菌体 功能 只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。 既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 【问题】DNA聚合酶与DNA连接酶是同一种酶的不同名称吗? 相 同 区 别 DNA聚合酶 形成磷酸 二酯键 只能将单个核苷酸连接到核酸片段上；以一条DNA链为模板,形成互补的DNA链。 DNA连接酶 将两个DNA片段之是形成磷酸二脂键；将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板。 3.“分子运输车”——载体 （1）载体的三大功能： ①为外源基因提供进入受体细胞的转移能力。 ②为外源基因提供在受体细胞的复制能力或整合力。 ③为外源基因提供在受体细胞的扩增和表达能力。 （2）基因工程使用的载体必需满足以下条件 （3）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 （4）其它载体： λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 它们来源不同，在大小、结构、复制以及插入片段大小上也有很大差别。 【巩固练习】限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。 ①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后形成的黏性未端。___________________________ ②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后形成的黏性未端。_____________________ ③在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性未端能否连接起来？为什么？________________________________________________________。 【知识总结】 ? 作用时间 作用及作用部位 解旋酶 DNA复制及转录时 打开DNA双链碱基对间的氢键，解开双螺旋 RNA 聚合酶 DNA转录时 与RNA聚合酶结合位点结合，启动RNA转录，并将一个个核糖核苷酸连接起来 DNA 聚合酶 DNA复制时 以DNA母链为模板，将一个个脱氧核苷酸连接起来，形成3,5－磷酸二酯键，形成新子链，其作用在于连接单个脱氧核苷酸 限制性 内切酶 提取目的基因及 运载体切割时 专一性地识别特定的脱氧核苷酸序列，并在特定的切点切断3,5－磷酸二酯键 DNA 连接酶 形成重组DNA时 可将目的基因与运载体连接起来，重建被限制酶切开的3,5－磷酸二酯键，其作用是连接两个DNA双链片段 二、基因工程的基本操作程序 第一步：目的基因的获取