[农学]酶的分子修饰.pptVIP

 Chapter 4 Modification of Enzyme Molecule 酶的分子修饰 Contents of chapter 3 1、什么是酶分子修饰 2、酶分子修饰的基本要求和条件 3、酶分子的修饰方法 4、酶修饰后的性质变化 5、酶分子修饰的应用 4.1 什么是酶分子修饰？ 定义 通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。 结构决定功能 4.1 什么是酶分子修饰？ 意义 增强酶的稳定性 stability 提高酶的活力 activity 降低或消除酶的抗原性 immunological property 研究和了解酶分子中主链、侧链、组成单位、金属离子和各种物理因素对酶分子空间构象的影响 structure 4.2 酶分子修饰的基本要求和条件 基本要求 对酶分子进行修饰必须在修饰原理、修饰剂和反应条件的选择以及酶学性质等方面都要有足够的了解。 酶的稳定性 酶活性中心的状况 4.2 酶分子修饰的基本要求和条件 基本条件 尽可能在酶稳定条件下进行，并尽量不破坏酶活性功能的必需基团，使修饰率高，同时酶的活力回收高。 注意： pH与离子强度 修饰反应的温度与时间 反应体系中酶与修饰剂的比例 4.3 酶分子的修饰方法 4.3.1 金属离子置换修饰 4.3.2 大分子结合修饰(共价/非共价) 4.3.3 侧链基团修饰 4.3.4 肽链有限水解修饰 4.3.5 氨基酸置换修饰 4.3.6 酶分子的物理修饰 4.3.1 金属离子置换修饰 定义 把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的特性和功能发生改变的修饰方法。 4.3.1 金属离子置换修饰 过程 （1） 酶的分离纯化 除去杂质，纯度 4.3.1 金属离子置换修饰 适用性 只适用于那些在分子结构中本来含有金属离子的酶。 举例 α-淀粉酶（杂离子型——钙型） SOD（Fe 2+——Mn 2+） 4.3.2 酶的大分子修饰 定义 采用水溶性大分子与酶的侧链基团共价结合，使酶分子的空间构象发生改变，从而改变酶的特性与功能的方法 修饰剂 可溶性大分子 聚乙二醇、右旋糖苷、蔗糖聚合物 4.3.2 酶的大分子修饰 过程 （1）修饰剂的选择 根据酶分子的结构和修饰剂的特性选择 4.3.2 酶的大分子修饰 举例 聚乙二醇修饰超氧物歧化酶 4.3.3 酶分子的侧链基团修饰 4.3.3 酶分子的侧链基团修饰 作用 提高酶活性； 增加稳定性； 降低抗原性； 引起酶催化活性、功能的改变； 获得自然界原来不存在的新酶种。 4.3.3 酶分子的侧链基团修饰 催化活性/非催化活性基团的修饰 对非催化基团修饰可改变酶的动力学性质，改变酶对特殊底物的束缚能力。 经常被修饰的残基是： 亲核的Ser、Cys、Met、Thr、Lys、His 亲电的Tyr、Trp 对催化活性基团可以通过选择性修饰侧链成分来实现氨基酸的取代。 4.3.3 酶分子的侧链基团修饰 常见基团的化学修饰反应：羧基 4.3.3 酶分子的侧链基团修饰 常见基团的化学修饰反应：氨基 4.3.3 酶分子的侧链基团修饰 常见基团的化学修饰反应：巯基 4.3.3 酶分子的侧链基团修饰 常见基团的化学修饰反应：咪唑基 4.3.3 酶分子的侧链基团修饰 常见基团的化学修饰反应：酚羟基 4.3.3 酶分子的侧链基团修饰 常见基团的化学修饰反应：胍基 4.3.3 酶分子的侧链基团修饰 4.3.4 酶蛋白主链修饰(肽链有限水解修饰) 定义 利用酶分子主链的切断和连接，使酶分子的化学结构及其空间结构发生某些改变，从而改变酶的特性和功能的方法。 主要是靠酶切/酶原激活法。 4.3.5 氨基酸置换修饰 方法 化学修饰方法 定点突变技术（site directed mutagenes